Verschil tussen directe en indirecte ELISA

Belangrijkste verschil - Directe versus indirecte ELISA
 

Een enzymgekoppelde immunoassay (ELISA), ook bekend als enzymimmunoassay, is een serologische test die antilichamen in het bloed detecteert. Het wordt gebruikt als een diagnostisch hulpmiddel om te achterhalen of de patiënt is blootgesteld aan een bepaald type virus of een ander infectieus agens (antigeen) en of het lichaam antilichamen tegen de infectie heeft geproduceerd. ELISA kan ook de vroegere en huidige infecties identificeren. Vandaar dat ELISA vaak wordt gebruikt als een screening door de artsen voorafgaand aan een grondige analyse van ziekten. Deze test kan in het laboratorium worden uitgevoerd door een bloedmonster van de patiënt te nemen. Er zijn twee soorten ELISA-tests: directe ELISA en indirecte ELISA. Het belangrijkste verschil tussen directe en indirecte ELISA is dat indirecte ELISA is gevoeliger en vereist de toevoeging van een secundair antilichaam terwijl directe ELISA is minder gevoelig en gebruikt alleen een primair antilichaam.

INHOUD
1. Overzicht en belangrijkste verschil
2. Wat is directe ELISA
3. Wat is indirecte ELISA
4. Vergelijking zij aan zij - Directe vs indirecte ELISA
5. Samenvatting

Wat is directe ELISA?

ELISA is een diagnostische ziekte-test die wordt uitgevoerd om de aanwezigheid van bepaalde antigenen of antilichamen in het bloed te identificeren. Het is gedaan als een plaatassay. Het maakt gebruik van antilichamen gekoppeld aan gemakkelijk te testen enzymen. De aanwezigheid van antigenen in het serummonster bindt met specifieke antilichamen verbonden met enzymen. In de laatste stap wordt een specifiek substraat toegevoegd om met het enzym te reageren. Het enzym zet het substraat om in een gekleurd of signaalproducerend product. De kleurverandering in het chemische substraat onthult de aanwezigheid van een bepaald antilichaam in het serummonster. Directe ELISA-test gebruikt alleen een primair antilichaam gekoppeld aan het enzym. Na binding aan het antigeen verandert het snel de kleur, wat wijst op de aanwezigheid van het infectieuze agens in het bloed. De intensiteit van de signalen is echter zwakker in directe ELISA omdat de epitopen beperkt zijn tot binding van de antigenen. Daarom is directe ELISA minder gevoelig in vergelijking met indirecte ELISA.

Afbeelding 01: Directe ELISA-test

Wat is indirecte ELISA?

ELISA kan worden uitgevoerd met behulp van twee soorten antilichamen namelijk; primair antilichaam en secundair antilichaam. Het indirecte ELISA-hulpmiddel gebruikt beide typen antilichamen om de signalen te versterken voor een betere detectie. Indirecte ELISA-techniek wordt als volgt uitgevoerd.

1. Platen worden geïncubeerd met antigenen en gewassen om niet-specifieke binding te blokkeren.
2. Vervolgens worden primaire antilichamen toegevoegd en gewassen.
3. Enzym-gekoppeld secundair antilichaam wordt toegevoegd en gewassen.
4. Een substraat wordt toegevoegd en men laat het reageren met enzymen.
5. Signalen worden gedetecteerd en de aanwezigheid of afwezigheid van het specifieke antigeen in het monster wordt geïdentificeerd.

Bij een indirecte ELISA-test kunnen verschillende secundaire antilichamen binden aan een enkel primair antilichaam. Secundaire antilichamen zijn gekoppeld aan gemakkelijk te testen enzymen. Daarom kan één binding een sterk signaal zijn vanwege meer dan één interactie. Daarom is indirecte ELISA gevoeliger dan directe ELISA. Indirecte ELISA kan echter niet-specifieke signalen maken als gevolg van kruisreacties van de secundaire antilichamen.

Figuur 02: Indirecte ELISA-test

Wat is het verschil tussen directe en indirecte ELISA?

Directe versus indirecte ELISA
Directe ELISA is minder gevoelig in vergelijking met indirecte ELISA.	Indirecte ELISA is gevoeliger.
Genomen tijd
Direct ELISA-test is een snel proces.	Indirecte ELISA is tijdrovend.
Gebruik van antilichamen
Slechts één type antilichamen (primaire antilichamen) wordt gebruikt in directe ELISA.	Primaire en secundaire antilichamen worden gebruikt voor indirecte ELISA.
Link met Enzymen
Primaire antilichamen zijn gekoppeld aan enzymen.	Secundaire antilichamen zijn gekoppeld aan enzymen.
Cross-Reactivity of Second Antibodies
Directe ELISA elimineert de kruisreactiviteit van tweede antilichamen.	Indirecte ELISA wordt beïnvloed door kruisreactiviteit van tweede antilichamen.
signalen
Signalen zijn zwak in vergelijking met indirecte ELISA.	Signalen worden geamplificeerd in indirecte ELISA. Daarom is het gemakkelijk te detecteren.

Samenvatting - Directe versus indirecte ELISA

ELISA is een biochemische techniek die voornamelijk in immunologie wordt gebruikt om de aanwezigheid van een antilichaam of een antigeen in een bloedmonster van een patiënt te detecteren. Het kan worden uitgevoerd via twee processen die bekend staan ​​als directe of indirecte ELISA. Directe ELISA-test gebruikt alleen primaire antilichamen om het antigeen te detecteren, terwijl indirecte ELISA zowel primaire als secundaire antilichamen gebruikt. In directe ELISA worden primaire antilichamen gemerkt, terwijl in indirecte ELISA secundaire antilichamen worden gelabeld. Dit is het verschil tussen directe en indirecte ELISA.

Referenties
1. "De enzymgekoppelde immunosorbenttest (ELISA)." Bulletin van de Wereldgezondheidsorganisatie. U.S. National Library of Medicine, 1976. Web. 29 maart 2017
2. Loon, A. M van, J. T Van Der Logt, F. W. Heessen, en J. Van Der Veen. "Enzym-linked immunosorbent assay waarbij gemerkt antigeen wordt gebruikt voor de detectie van immunoglobuline M en A-antilichamen bij toxoplasmose: vergelijking met indirecte immunofluorescentie en dubbel-sandwich enzymgekoppelde immunosorbenttest." Journal of Clinical Microbiology. U.S. National Library of Medicine, juni 1983. Web. 29 maart 2017

Afbeelding met dank aan:
1. "ELISA-diagram" door Cavitri - Eigen werk (CC BY 3.0) via Commons Wikimedia 
2. "Indirect ELISA" door Cawang - Eigen werk (CC0) via Commons Wikimedia