Verschil tussen directe en indirecte immunofluorescentie

De belangrijk verschil tussen directe en indirecte immunofluorescentie is dat het directe immunofluorescentie gebruikt een enkel antilichaam dat tegen het doelwit van belang werkt, terwijl de indirecte immunofluorescentie twee antilichamen gebruikt om het doelwit van interesse te labelen.

Immunofluorescentie of celafbeelding is een techniek die wordt gebruikt om een ​​specifiek doelantigeen te labelen met een fluorofoor. Hier is de fluorofoor een fluorescerende chemische verbinding die licht opnieuw kan uitzenden bij lichtexcitatie. Als een fluorofoor zich bindt met het doelantigeen, kan het doelmolecuul in het monster worden gedetecteerd. Om het verder te beschrijven, wanneer een antigeen aan een specifiek antilichaam bindt, kan het met fluoroforen worden geconjugeerd. Daarom is het gemakkelijk om de aanwezigheid van het doelwitantigeen in het monster te detecteren wanneer wordt waargenomen onder de fluorescentiemicroscoop.

Bovendien zijn er twee soorten immunofluorescentie; directe en indirecte immunofluorescentie. Het verschil tussen directe en indirecte immunofluorescentie ligt voornamelijk in het aantal gebruikte antilichamen en de fluorofoor-conjugatie. Dat wil zeggen, in directe immunofluorescentie, de fluorofoor direct conjugeren met het primaire antilichaam, terwijl bij indirecte immunofluorescentie, het fluorofoor-conjugaat met het secundaire antilichaam.

INHOUD

1. Overzicht en belangrijkste verschil
2. Wat is directe immunofluorescentie
3. Wat is indirecte immunofluorescentie
4. Overeenkomsten tussen directe en indirecte immunofluorescentie
5. Vergelijking zij aan zij - Directe vs. indirecte immunofluorescentie in tabelvorm
6. Samenvatting

Wat is directe immunofluorescentie?

Immunofluorescentie gebruikt antilichamen om specifieke doelwitantigenen te detecteren. Directe immunofluorescentie is een van de twee soorten immunofluorescentie. Bij directe immunofluorescentie omvat een enkel antilichaam (primair antilichaam) en de fluorofoor direct conjugaten met het primaire antilichaam. Na binding van het antilichaam met het doelantigeen emitteert fluorofoor fluorescentie die kan worden gedetecteerd door een fluorescentiemicroscoop.

Figuur 01: Directe immunofluorescentie

Directe immunofluorescentie is echter een dure methode, omdat de primaire geconjugeerde antilichamen duur zijn in vergelijking met de secundaire antilichamen. Desondanks is er geen extra stap nodig, vandaar een kortere techniek. Verder zijn niet-specifieke bindingen verminderd in directe immunofluorescentie. Daarom is soort kruisreactiviteit laag. Maar bij detectie is de gevoeligheid van de directe immunofluorescentie zwak in vergelijking met de indirecte immunofluorescentie .

Wat is indirecte immunofluorescentie?

Indirecte immunofluorescentie is het tweede type van de immunofluorescentie dat twee typen antilichamen omvat, zoals primaire en secundaire antilichamen bij het labelen van het doelantigeen. In deze methode conjugeert de fluorofoor met het secundaire antilichaam. Vandaar dat deze techniek een extra stap omvat.

Figuur 02: Immunofluorescentie

De gevoeligheid is echter hoog in deze methode omdat verschillende fluoroforen kunnen worden geconjugeerd aan secundaire antilichamen en het de detectie gemakkelijker maakt. Bovendien is indirecte immunofluorescentie minder duur vanwege het feit dat de conjugatie van secundaire antilichamen minder duur en gemakkelijker is. In vergelijking met de directe immunofluorescentie is de kruisreactiviteit van species groot bij de indirecte methode.

Wat zijn de overeenkomsten tussen directe en indirecte immunofluorescentie?

• Het zijn twee soorten immunofluorescentie-technieken.
• Primaire antilichamen en fluorofoor hebben betrekking op beide methoden.
• Ook vindt de antigeen-antilichaamreactie in beide werkwijzen plaats.
• Bovendien gebruiken zowel directe als indirecte immunofluorescentie een fluorescentiemicroscoop voor de detectie van antigeen.

Wat is het verschil tussen directe en indirecte immunofluorescentie?

Immunofluorescentie kan direct of indirect zijn gebaseerd op de fluorofoor-conjugatie met de gebruikte antilichamen. Bij directe immunofluorescentie conjugeert de fluorofoor met het primaire antilichaam, dat het enige antilichaam is dat bij deze techniek betrokken is. In tegenstelling tot dat, in indirecte immunofluorescentie, conjugeert de fluorofoor met het secundaire antilichaam, dat één van de twee soorten antilichamen is die bij de techniek betrokken zijn. Daarom is het belangrijkste verschil tussen directe en indirecte immunofluorescentie het antilichaamtype dat met de fluorofoor conjugeert.

De volgende infographic verschaft een zij-aan-zij vergelijking van het verschil tussen directe en indirecte immunofluorescentie.

Samenvatting - Directe vs. indirecte immunofluorescentie

Immunofluorescentie is een techniek die wordt gebruikt om de aanwezigheid van specifieke antigenen in een monster te detecteren. Deze techniek maakt gebruik van specifieke antilichamen. Daarom conjugeren de antilichamen hierin met fluoroforen om ze te detecteren met behulp van een fluorescentiemicroscoop. Bovendien zijn er twee soorten immunofluorescentie namelijk, directe en indirecte immunofluorescentie. Directe immunofluorescentie omvat een enkel antilichaam en fluorofoor die direct aan dit antilichaam zijn geconjugeerd. Indirecte immunofluorescentie omvat twee antilichamen; primaire en secundaire en fluorofoor geconjugeerd aan het secundaire antilichaam. Omdat verschillende secundaire antilichamen kunnen binden met een primair antilichaam en verschillende fluoroforen kunnen conjugeren met secundaire antilichamen, is indirecte immunofluorescentie een meer gevoelige methode dan de directe methode. Bovendien is de indirecte methode goedkoper dan de directe methode. Dit is dus het verschil tussen directe en indirecte immunofluorescentie.

Referentie:

1. "Immunofluorescentie." Wikipedia, Wikimedia Foundation, 19 augustus 2018. Beschikbaar Hier 

Afbeelding met dank aan:

1. "HSP IF IgA" door Emmanuelm op en.wikipedia, (CC BY 3.0) via Commons Wikimedia
2. "Immunofluorescentie" door Westhayl618 - Eigen werk, (CC BY-SA 4.0) via Commons Wikimedia