Verschil tussen Southern Northern en Western Blotting
Share
De grootste verschil tussen Southern Northern en Western blotting is dat de Southern-blotting omvat de identificatie van DNA, en de Northern-blotting omvat de identificatie van RNA, terwijl de Western-blotting de identificatie van eiwitten omvat..
Southern, Northern en Western zijn drie blottingtechnieken die worden gebruikt om een specifiek DNA-, RNA- of eiwitmolecuul in een monster te detecteren. Tijdens het blotten worden de macromoleculen overgebracht naar een membraan van de gel en gemaakt om te binden met een specifiek nucleïnezuur of antilichaam dat helpt bij de detectie.
Key areas Covered
1. Wat is Southern Blotting
- Definitie, proces, toepassingen
2. Wat is Northern Blotting
- Definitie, proces, toepassingen
3. Wat is Western Blotting
- Definitie, proces, toepassingen
4. Wat zijn de overeenkomsten tussen Southern Northern en Western Blotting
- Overzicht van gemeenschappelijke functies
5. Wat is het verschil tussen Southern Northern en Western Blotting
- Vergelijking van belangrijke verschillen
Sleutelbegrippen
Antilichaam, DNA, Elektroforese, Northern Blotting, RNA, Proteïnen, Southern Blotting, Western Blotting
Wat is Southern Blotting
Southern-blotting is de techniek die wordt gebruikt om een specifieke DNA-sequentie in een mengsel van DNA's te detecteren. De basisstappen van een Southern-blot zijn zoals hieronder.
elektroforese - Het scheidt het DNA-monster in verschillende banden op basis van de grootte door middel van gelelektroforese.
Overdracht - Tijdens de overdracht wordt een nitrocellulosemembraan in contact gebracht met de gel en de DNA-banden bewegen door de capillaire werking op het membraan.
Detectie van specifieke sequenties - De doelwitsequentie op het membraan wordt gehybridiseerd met de specifieke gelabelde oligonucleotidesequentie die de hybridisatieprobe wordt genoemd. De hybridisatieprobe is een korte, 100-500 bp grote, enkelstrengige DNA-molecule. Stringentie, die afhangt van de temperatuur en de zoutconcentratie van de hybridisatiebuffer, beïnvloedt hybridisatie. Hoge stringentie gedefinieerd door de hoge temperatuur en lage zoutconcentratie verhoogt de specificiteit van de hybridisatie, terwijl lage stringentie gedefinieerd door lage temperatuur en hoge zoutconcentratie de specificiteit vermindert.
Figuur 1: Southern-blotting
Het voornaamste doel van Southern-blotting is het detecteren van een specifieke DNA-sequentie in een monster. De techniek wordt gebruikt bij DNA-vingerafdrukken, vaderschapstesten, identificatie van slachtoffers en identificatie van criminelen. Het helpt ook bij de identificatie van specifieke genen, in RFLP (restrictiefragmentlengte-polymorfisme), mutatie en identificatie van genherschikking, genetische ziekten en infectieuze agentia..
Wat is Northern Blotting
Northern-blotting is de techniek die wordt gebruikt om een specifiek RNA in een mengsel van RNA's te detecteren. De basisstappen van een Northern Blot zijn zoals hieronder.
elektroforese - Het scheidt het RNA-monster volgens de grootte in verschillende banden.
Overdracht - Door capillaire werking worden RNA-banden in de gel op het membraan overgebracht.
Detectie van specifieke sequenties - De doelwit-RNA-sequentie wordt gedetecteerd door hybridisatie met een gemerkte oligonucleotide-probe die bestaat uit DNA.
Figuur 2: Northern-blotting
Omdat Northern-blotting specifieke RNA-sequenties in een monster kan identificeren, kan het worden gebruikt in de genexpressieonderzoeken. Het kan ook helpen bij de diagnose van ziekten.
Wat is Western Blotting
Western blot is een blottingtechniek die wordt gebruikt om een specifieke aminozuursequentie in een mengsel van eiwitten te detecteren. De basisstappen van een Western Blot zijn zoals hieronder.
elektroforese - Afzonderlijke eiwitten worden gescheiden op basis van de grootte in banden door SDS-PAGE.
Overdracht - Eiwitbanden in de gel worden door blotten op een membraan overgebracht.
Detectie van specifieke eiwitten - Het membraan met gescheiden eiwitten wordt geïncubeerd met een primair antilichaam dat alleen aan het specifieke eiwit bindt. Een secundair antilichaam, dat is gemerkt met een enzym zoals mierikswortelperoxidase (HRP) of alkalische fosfatase, wordt gebruikt om het primaire antilichaam te detecteren. Wanneer geïncubeerd met het substraat, visualiseert de enzymactie de binding van antilichamen aan een specifiek gebied op het membraan.
Figuur 3: Western-blotting
Western blotting wordt ook eiwitvlek of immunoblotting genoemd. Het kan het aantal eiwitten in een monster, de aanwezigheid van bacteriën en virussen in het serum en de aanwezigheid van HIV-antilichamen in het serum identificeren. Het kan ook defecte eiwitten detecteren. Bovendien is western blotting de definitieve test voor Hepatitis B, de ziekte van Creutzfeldt-Jacob, de ziekte van Lyme en Herpes.
Overeenkomsten tussen Southern Northern en Western Blotting
- Southern blotting, Northern blotting en Western blotting zijn drie blottingtechnieken die worden gebruikt om een bepaald type macromolecuul in een monster te identificeren..
- De drie stappen van de blottingtechnieken zijn elektroforese, overdracht en detectie.
- Elke techniek vereist denaturatie en blokkering met het overtollige, corresponderende macromolecuul.
- Elke techniek heeft toepassingen in de biotechnologie en de geneeskunde.
Verschil tussen Southern Northern en Western Blotting
Definitie
Southern-blotting verwijst naar een procedure voor het identificeren van specifieke DNA-sequenties, terwijl Northern-blotting verwijst naar een aanpassing van de Southern-blot-procedure die wordt gebruikt voor het detecteren van specifieke RNA-sequenties door hybridisatie met complementair DNA en Western-blotting verwijst naar een blotprocedure die wordt gebruikt voor het identificeren van specifiek aminozuur. -zuursequenties in eiwitten.
Ontwikkeld door
Southern blotting werd ontwikkeld door Edward M. Southern in 1975. Northern blotting werd ontwikkeld door Alwine en zijn collega's in 1979, en Western blotting werd ontwikkeld door George Stark's groep aan de Stanford University in 1979..
Molecuul gedetecteerd
Southern-blotting detecteert specifieke DNA-sequenties, Northern-blotting detecteert specifieke RNA-sequenties, terwijl Western-blotting specifieke eiwitten detecteert.
Gelelektroforese
Southern-blotanalyse omvat Agarose-gelelektroforese en Northern-blotten omvat denaturerende formaldehyde-agarosegel, terwijl Western-blotting SDS-PAGE omvat..
Blotting-methode
Zowel Southern- als Northern-blotting hebben betrekking op capillaire overdracht, terwijl Western-blotting een elektrische overdracht omvat.
probes
Southern-blotten maakt gebruik van DNA-probes terwijl Northern-blotting cDNA-probes gebruikt en Western-blotting primaire en secundaire antilichamen gebruikt.
Toepassing
Southern-blotting wordt gebruikt om specifieke gensequenties en in DNA-fingerprinting te identificeren. Northern-blotting wordt gebruikt in genexpressie-analyse en Western-blotting wordt gebruikt bij ziektediagnostiek.
Conclusie
Southern-blotting identificeert specifieke DNA-sequentie, terwijl Northern-blotting specifieke RNA-sequentie identificeert en Western-blotting identificeert specifieke eiwitsequentie in een monster. Daarom is het belangrijkste verschil tussen de drie blottingtechnieken het type macromolecule dat ze detecteren.
Referentie:
1. "Southern Blotting: Principle, Procedure and Application -." ONLINE BIOLOGY NOTES, 4 december 2017, hier beschikbaar
2. Kochunni, Deena T en Jazir Haneef. "Northern Blotting: Principle, Procedure and Applications." Biologie Examens 4 U, hier beschikbaar
3. "Western Blotting Technique: Principle, Procedure and Application -." BIOLOGIE ONLINE OPMERKINGEN, 4 december 2017, hier beschikbaar
Afbeelding met dank aan:
1. "Figuur 17 01 05" door CNX OpenStax - (CC BY 4.0) via Commons Wikimedia
2. "Northern blot diagram" door Ilewieszoośmiornicach - Eigen werk (CC BY-SA 4.0) via Commons Wikimedia
3. "Western Blotting" door Cawang - Eigen werk (CC0) via Commons Wikimedia
