Verschil tussen nitrocellulose en nylon membraan

De grootste verschil tussen nitrocellulose en nylonmembraan is dat het nitrocellulosemembraan heeft een hoge affiniteit voor eiwitbinding terwijl het nylonmembraan een hoge affiniteit heeft voor nucleïnezuurbinding. Bovendien binden hydrofobe en elektrostatische interacties macromoleculen aan de nitrocellulosemembranen, terwijl ionische, hydrofobe en elektrostatische interacties macromoleculen binden aan de nylonmembranen

Nitrocellulose en nylonmembraan zijn twee soorten membranen waaraan de macromoleculen worden overgedragen van de gel. Nitrocellulosemembranen kunnen echter ook worden gebruikt om DNA en RNA te binden.

Key Areas Covered

1. Wat is een nitrocellulosemembraan
     - Definitie, structuur, mechanisme van binding, voordelen 
2. Wat is een nylon membraan
     - Definitie, structuur, mechanisme van binding, voordelen 
3. Wat zijn de overeenkomsten tussen nitrocellulose en nylon membraan
     - Overzicht van gemeenschappelijke functies
4. Wat is het verschil tussen nitrocellulose en nylon membraan
     - Vergelijking van belangrijke verschillen

Sleutelbegrippen

Affinity, Biodyne A, Biodyne B, Nitrocellulose, Nucleic Acids, Nylon, Pore Size, Proteins

Wat is een nitrocellulosemembraan

Nitrocellulosemembraan is een algemene matrix die wordt gebruikt bij Western-blotting vanwege de hoge eiwitbindingsaffiniteit. Het kan echter worden gebruikt voor het detecteren van nucleïnezuren afgezien van geïmmobiliseerde eiwitten en glycoproteïnen. De immobilisatie van de macromoleculen vindt voornamelijk plaats door hydrofobe interacties. Waterstofbindingen worden ook gevormd tussen de nitrogroepen van het membraan en de aminozuurzijketens van de eiwitten. Eiwitimmobilisatie zal hoog zijn in de hoge zout- en lage methanolconcentraties.

Figuur 1: Principe van Blot

Nitrocellulosemembranen zijn beschikbaar in 100% zuivere vormen van nitrocellulose met een hoog specifiek oppervlak, dat uniform is. De beschikbare pre-maten zijn 0,2 μm en 0,45 μm. De kleine poriegrootte is beter voor de binding met kleine eiwitten (<14 kDa). The binding and retaining capacity of proteins is 80-250 μg/cm². De voorgemonteerde membranen zijn klaar voor gebruik. Een van de belangrijkste voordelen van nitrocellulosemembranen is de zeer lage achtergrond omdat deze gemakkelijk kan worden geblokkeerd. De ondersteunde nitrocellulosemembranen kunnen worden gestript en opnieuw worden beschreven.

Wat is een nylon membraan

Nylonmembraan is een veel gebruikte matrix voor de binding van nucleïnezuren. Nylon membranen zijn mechanisch sterk dan nitrocellulosemembranen. De twee hoofdtypen nylonmembranen die bij blotting worden gebruikt, zijn Biodyne A en Biodyne B. De poriegrootte van beide typen is 0,45 μm. Ze zijn bestand tegen hitte en oplosmiddelen. Ook zullen ze niet krimpen, barsten of scheuren. Beide geven een lage achtergrond dan nitrocellulosemembranen.

Figuur 2: Southern Blot-membraan

• Biodyne A is samengesteld uit ongemodificeerd nylon 66. Hoge gevoeligheid en uitstekende resolutie zijn de voordelen van Biodyne A. Omdat Biodyne A zowel positieve als negatieve ladingen bevat, kan het worden gebruikt om vele soorten macromoleculen te binden..
• Biodyne B is gemaakt van positief geladen nylon 66. Daarom heeft het een uitstekende bindingscapaciteit voor negatief geladen nucleïnezuren zoals DNA en RNA.

Overeenkomsten tussen nitrocellulose en nylon membraan

• Nitrocellulose- en nylonmembranen zijn twee soorten membranen die worden gebruikt om macromoleculen uit de gel over te brengen in blottingtechnieken.
• Ze maken de detectie van macromoleculen op het membraan mogelijk.
• Beide typen membranen kunnen worden gebruikt om nucleïnezuren over te dragen.
• Ze kunnen worden gestript en opnieuw geproblematiseerd.

Verschil tussen nitrocellulose en nylon membraan

Definitie

Nitrocellulosemembraan verwijst naar een kleverig membraan dat wordt gebruikt voor het immobiliseren van nucleïnezuren en eiwitten bij blotten, terwijl nylonmembraan verwijst naar een type membraan met hoge sterkte en hittebestendigheid dat wordt gebruikt om macromoleculen te immobiliseren.

Gemaakt van

Nitrocellulosemembranen bestaan ​​uit genitreerde cellulose, terwijl nylon membranen bestaan ​​uit niet-gemodificeerd of positief geladen Biodyne A en Biodyne B nylon.

Porie grootte

De poriegroottes van nitrocellulosemembranen zijn 0,2 μm en 0,45 μm, terwijl de poriëngrootte van de nylonmembranen 0,45 μm is.

Sterkte

Nitrocellulosemembranen zijn broos en dus niet herbruikbaar, terwijl nylon membranen mechanisch sterk zijn.

Overdrachtmethode

Elektroforetische overdracht wordt hoofdzakelijk gebruikt bij de overdracht van eiwitten op de nitrocellulosemembranen, terwijl capillaire overdracht de gebruikelijke praktijk is met nylonmembranen.

Affiniteit

Nitrocellulosemembranen hebben een hoge affiniteit voor eiwit, terwijl nylonmembranen een hoge affiniteit voor nucleïnezuren hebben. Nitrocellulosemembranen kunnen ook worden gebruikt voor nucleïnezuren.

blotting

Nitrocellulosemembranen zijn beter voor Western-blotting, terwijl nylonmembranen beter zijn voor Southern en Northern Blotting.

Bindende interacties

Hydrofobe en elektrostatische interacties binden macromoleculen aan de nitrocellulosemembranen, terwijl ionische, hydrofobe en elektrostatische interacties macromoleculen binden aan de nylonmembranen.

Eiwitbindende capaciteit

De eiwitbindende capaciteit van nitrocellulosemembraan is 80-250 μg / cm² terwijl de eiwitbindende capaciteit van nylonmembraan 150-200 μg / cm is².

Conclusie

Nitrocellulosemembraan is een bros membraan dat hoofdzakelijk wordt gebruikt om eiwit te immobiliseren bij Western-blotting, terwijl nylonmembraan een sterk membraan is dat hoofdzakelijk wordt gebruikt voor het immobiliseren van nucleïnezuren. De nitrocellulosemembranen binden moleculen door hydrofobe interacties terwijl de nylonmembranen moleculen binden door elektrostatische interacties. Daarom is het belangrijkste verschil tussen nitrocellulose en nylonmembraan de affiniteit.

Referentie:

1. "Nitrocellulose Membranen voor Western Blotting | Thermo Fisher Scientific - LK. "Thermo Fisher Scientific, Thermo Fisher Scientific, hier beschikbaar
2. "Biodyne A nylonmembraan, 0,45 m, 8 Cm x 12 Cm." Thermo Fisher Scientific, Thermo Fisher Scientific, hier beschikbaar
3. "Biodyne B nylonmembraan, 0,45 m, 8 Cm x 12 Cm." Thermo Fisher Scientific, Thermo Fisher Scientific, hier beschikbaar

Afbeelding met dank aan:

1. "Blot-biologie" door Gbdivers - Eigen werk (CC BY-SA 3.0) via Commons Wikimedia
2. "Southern blot membrane" door Bojan Žunar - Eigen werk (CC BY-SA 4.0) via Commons Wikimedia