Verschil tussen immunofluorescentie en immunohistochemie

Belangrijkste verschil - Immunofluorescentie versus immunohistochemie
 

Ziektediagnostiek, waarbij gebruik wordt gemaakt van moleculair-biologische methoden, is een opkomend gebied van de klinische laboratoriumtechnologie geworden. Het omvat alle tests en methoden om een ​​ziekte te identificeren en de oorzaak van een ziekte te begrijpen door het analyseren van DNA, RNA of tot expressie gebrachte eiwitten in een organisme. Snelle vooruitgang in moleculaire diagnostiek heeft fundamenteel onderzoek mogelijk gemaakt naar overdraagbare en niet-overdraagbare ziekten. Deze worden gebruikt om veranderingen in sequentie- of expressieniveaus in cruciale genen of eiwitten die betrokken zijn bij ziekte te bepalen. Immunofluorescentie (IF) en immunohistochemie (IHC) zijn twee van dergelijke veel gebruikte technieken in de kankerbiologie. IF is een type IHC waarbij een fluorescentiedetectiemethode wordt gebruikt om monoklonale en polyklonale antilichamen te analyseren, terwijl IHC op chemische basis gebaseerde methoden gebruikt om de monoklonale en polyklonale antilichamen te detecteren. Dit is het belangrijkste verschil tussen IF en IHC.

INHOUD

1. Overzicht en belangrijkste verschil
2. Wat is immunofluorescentie 
3. Wat is immunohistochemie
4. Overeenkomsten tussen immunofluorescentie en immunohistochemie
5. Vergelijking zij aan zij - Immunofluorescentie versus immunohistochemie in tabelvorm
6. Samenvatting

Wat is immunofluorescentie (IF)?

Immunofluorescentie is een detectietechniek waarbij de in de test gebruikte antilichamen worden gemerkt met behulp van fluorescerende kleurstoffen of fluorescerende eiwitten voor het detectiedoel. Gemerkte secundaire antilichamen kunnen resulteren in ongewenste achtergrondsignalen; daarom is IF-techniek gebaseerd op het op het moment labelen van het primaire antilichaam zelf om ongewenste signalen tijdens detectie te vermijden. Door deze techniek wordt niet-specifieke binding tussen het primaire en het secundaire antilichaam voorkomen, en het is sneller omdat er geen secundaire incubatiestap is betrokken. De datakwaliteit is ook verbeterd.

Figuur 01: Dubbele immunofluorescentiekleuring voor BrdU, NeuN en GFAP

Fluorochromen of fluorescerende kleurstoffen zijn verbindingen die straling kunnen absorberen, bij voorkeur ultraviolette straling die wordt geëxciteerd. Wanneer de deeltjes vanuit de geëxciteerde toestand de grondtoestand bereiken, zenden ze straling uit die wordt opgevangen en gedetecteerd door een detector om een ​​spectrum te vormen. Het is van groot belang dat het fluorescerende label compatibel en stabiel is voor de specifieke reactie en het moet op de juiste wijze aan het antilichaam worden geconjugeerd om nauwkeurige resultaten te verkrijgen. Een van de meest gebruikte fluorochromen is fluoresceïne-isothiocyanaat (FITC), dat een groene kleur heeft, met absorptie- en emissiepiekgolflengten van respectievelijk 490 nm en 520 nm. Rhodamine, een ander middel dat wordt gebruikt in IF, is rood van kleur en heeft verschillende absorptie- en emissiepiekgolflengten van 553 nm en 627 nm.

Wat is immunohistochemie (IHC)?

IHC is een moleculaire testmethode die wordt toegepast om de aanwezigheid van het antigeen in de doelwitcel te identificeren en te bevestigen. De doelcel zou een infectueus deeltje, een microbieel pathogeen of een kwaadaardige tumorcel kunnen zijn. IHC gebruikt monoklonale en polyklonale antilichamen om de aanwezigheid van antigenen aanwezig op het celoppervlak van de doelwitcellen te bepalen. De techniek is gebaseerd op binding van antigeen-antilichaam. Een detectiemerker wordt geconjugeerd aan deze antilichamen om de aanwezigheid of de afwezigheid van het specifieke antigeen te detecteren. Deze markers kunnen chemische markers zijn, zoals enzymen, fluorescent gelabelde antilichamen of radio-gemerkte antilichamen.

Figuur 02: Plakje muizenhersenen gekleurd door Immunohistochemie

De meest populaire toepassing van IHC is in de biologie van kankercellen om de aanwezigheid van kwaadaardige tumoren te identificeren, maar het wordt ook gebruikt voor de detectie van infectieziekten..

Wat zijn de overeenkomsten tussen immunofluorescentie en immunohistochemie?

• Immunofluorescentie en immunohistochemie vinden plaats onder in vitro omstandigheden.
• Beide technieken zijn gebaseerd op het antigeen-antilichaam
• Beide zijn zeer snelle technieken.
• Resultaten van de technieken zijn reproduceerbaar.
• Beide hebben een verbeterde datakwaliteit.
• Deze technieken worden gebruikt in de diagnostiek voor kanker en infectieziekten.

Wat is het verschil tussen immunofluorescentie en immunohistochemie?

Immunofluorescentie versus immunohistochemie
IF is een detectietechniek waarbij de in de test gebruikte antilichamen worden gemerkt met behulp van fluorescente kleurstoffen of fluorescerende eiwitten voor detectie.	IHC is een detectietechniek waarbij de antilichamen die in de test worden gebruikt, worden gelabeld met behulp van chemicaliën of radioactieve elementen voor detectie.
Nauwkeurigheid
Nauwkeurigheid is hoger in IF-techniek in vergelijking met IHC.	De nauwkeurigheid is lager in IHC.
specificiteit
ALS is specifieker.	IHC is minder specifiek.

Samenvatting - Immunofluorescentie versus immunohistochemie

Moleculaire mechanismen hebben veel veranderingen op het gebied van de geneeskunde teweeggebracht, waardoor geavanceerde moleculaire testmethoden zijn ontstaan ​​die revoluties op het gebied van diagnostiek teweeg hebben gebracht. Deze uitvindingen hebben geleid tot een snelle en nauwkeurige identificatie en bevestiging van de ziekte, waardoor succesvolle toediening en productie van geneesmiddelen mogelijk is. Deze technieken worden ook gebruikt in de farmacologie om de doelwitten van geneesmiddelen te vinden en om de farmacokinetische eigenschappen van het medicijn tijdens medicijnmetabolisme te bevestigen. IF en IHC zijn twee diagnostische methoden die zijn gebaseerd op het concept van antigeen en antilichaambinding, hoewel de detectiewijze in beide technieken verschilt. IF maakt gebruik van het principe van fluorescentie om het antigeen te detecteren en IHC gebruikt het concept van chemische conjugatie om het antigeen te detecteren. Dit is het verschil tussen IF en IHC.

PDF-versie van immunofluorescentie versus immunohistochemie downloaden

U kunt de PDF-versie van dit artikel downloaden en gebruiken voor offline doeleinden, zoals per citaatnotitie. Download hier de PDF-versie. Verschil tussen immunofluorescentie en immunohistochemie.

Referenties:

1. Aoki, Valéria, et al. "Directe en indirecte immunofluorescentie." Anais Brasileiros de Dermatologia, SociedadeBrasileira de Dermatologia, Beschikbaar Hier. Toegankelijk 25 augustus 2017.
2. Duraiyan, Jeyapradha, et al. "Toepassingen van immunohistochemie." Journal of Pharmacy & Bioallied Sciences, Medknow Publications & Media Pvt Ltd, aug. 2012, Beschikbaar Hier. Toegankelijk 25 augustus 2017.

Afbeelding met dank aan:

1. "Dubbele immunofluorescentiekleuring voor BrdU, NeuN en GFAP" Door Ma M, Ma Y, Yi X, Guo R, Zhu W, Fan X, Xu G, Frey WH 2e, Liu X. - Intranasale afgifte van transformerende groeifactor- beta1 in muizen na een beroerte vermindert het infarctvolume en verhoogt de neurogenese in de subventriculaire zone; PMID 19077183 (CC BY 2.0) via Commons Wikimedia
2. "Hypothalamus van een muisweefsel gekleurd door ABC-immunohistochemie" door zabbn - eigen werk (CC BY-SA 3.0) via Commons Wikimedia