Verschil tussen Gramkleuring en Acid Fast

Belangrijkste verschil - Gramkleuring versus zuur snel

Bacteriën zijn zeer kleine micro-organismen. Ze zijn transparant en hun detectie is moeilijk onder leef- en onbetaalde omstandigheden. Aldus worden verschillende kleuringsmethoden ontwikkeld om bacteriedetectie te vergemakkelijken. Er zijn drie hoofdtypen kleuringstechnieken: eenvoudige kleuring, differentiële kleuring en structurele kleuring. Differentiële kleuring is een techniek die meer dan één kleuring gebruikt om bacteriën te differentiëren. Gram-kleuring en zuursnelle kleuring zijn in de volksmond bekend als differentiële vlekken. Gramkleuring is een differentiële kleuringstechniek, die bacteriën scheidt in twee groepen die Gram-positieve bacteriën en Gram-negatieve bacteriën worden genoemd. De zuur-snelle kleuring is een differentiële kleuring die wordt gebruikt om zuur-snelle organismen te identificeren, zoals Mycobacterium van niet-zure snelle organismen. Dit is het belangrijkste verschil tussen Gram-kleuring en Acid Fast-kleuring.

INHOUD

1. Overzicht en belangrijkste verschil
2. Wat is Gramkleuring
3. Wat is zuur snel
4. Overeenkomsten tussen Gramkleuring en Acid Fast
5. Vergelijking zij aan zij - Gramkleuring versus zuur snel in tabelvorm
6. Samenvatting

Wat is Gramkleuring?

Gramkleuring is een belangrijke differentiële kleuringstechniek die wordt gebruikt voor bacteriële identificatie in de microbiologie. Deze techniek werd geïntroduceerd door de Deense bacterioloog Hans Christian Gram in 1884. Gramkleuring categoriseert bacteriën in twee hoofdgroepen, gram-positief en gram-negatief, die erg belangrijk zijn bij bacteriële classificatie en identificatie. Microbiologen voeren gramkleuring uit als een eerste stap in de bacteriële karakterisering tijdens hun studies.

Bacteriën zijn gegroepeerd op basis van de verschillen in hun celwand. Gram-positieve bacteriën bestaan uit een dikke peptidoglycaanlaag in hun celwand, terwijl gram-negatieve bacteriën bestaan uit een dunne peptidoglycanlaag in hun celwand. De uitkomst van de gramkleuring zal gebaseerd zijn op het verschil in de dikte van de peptidoglycanlaag van de celwand.

Gramkleuring wordt uitgevoerd met behulp van vier verschillende reagentia namelijk; primaire vlek, beitsmiddel, ontkleuringsmiddel en tegenkleuring. Kristalviolet en safranine worden gebruikt als respectievelijk de primaire en tegenkleuren, terwijl gram jodium en 95% alcohol respectievelijk worden gebruikt als bijtmiddel en decolourizer. De basisstappen van gramkleuring zijn als volgt;

Een bacteriële uitstrijk wordt bereid op een schoon glasplaatje, de warmte wordt gefixeerd en gekoeld.
Uitstrijkje wordt overspoeld met kristalviolet gedurende 1 - 2 minuten.
Smeer wordt gespoeld met langzaam stromend leidingwater om overtollige vlekken te verwijderen.
Gram-jodium wordt gedurende 1 minuut op het uitstrijkje aangebracht.
Smeer wordt gespoeld met langzaam stromend kraanwater
Smeer wordt gewassen met 95% alcohol gedurende 2-5 seconden en gespoeld met langzaam stromend leidingwater.
Smear is gedurende 1 minuut in tegenaanval gekleurd met safranin
Smeer wordt gespoeld met langzaam stromend kraanwater, gedroogd en onder de microscoop waargenomen.

Aan het einde van de gramkleuring zullen gram-negatieve bacteriën in roze kleur worden waargenomen, terwijl gram-positieve bacteriën in paarse kleur zullen worden waargenomen.

Figuur 01: Gram-negatieve en Gram-positieve bacteriën

Het resultaat van de gramkleuring wordt bepaald door de dikte van de peptidoglycanlaag in hun celwand. Tijdens de ontkleuringsstap worden primaire kleuring en het beitsmiddel gemakkelijk uit de gramnegatieve bacteriën verwijderd en worden kleurloos, omdat ze een dunne peptidoglycanlaag hebben. De primaire kleuring blijft behouden in de grampositieve bacteriën omdat ze een dikke peptidoglycanlaag hebben. De tegenkleuring zal niet effectief zijn voor gram-positieve bacteriën als gevolg van de retentie van de primaire kleuring. Aldus zullen gram-positieve bacteriën zichtbaar zijn in primaire kleurstof, dat wil zeggen paarse kleur. De tegenkleuring zal de Gram-negatieve bacteriën bevlekken en ze zullen zichtbaar zijn in de pickkleur, wat de safranin-kleur is. Daarom is het gemakkelijk om bacteriën in twee groepen te categoriseren door middel van gramkleuring en het is waardevol in bacteriële differentiatie en identificatie.

Wat is zuur snel?

Zuurvastheid is een fysische eigenschap van bepaalde bacteriën, met name hun weerstand tegen ontkleuring door zuren tijdens kleuringsprocedures. Eenmaal gekleurd, zijn deze organismen bestand tegen decontilatieprocedures met verdund zuur en of ethanol, wat gebruikelijk is in veel kleuringsprotocollen. Zo wordt de naam 'zuurvast' aan die organismen gegeven. Deze eigenschap wordt getoond vanwege het feit dat ze een hoog gehalte aan wasachtig materiaal (mycolzuren) in hun celwanden hebben. Deze test is cruciaal voor de identificatie van Mycobacterium tuberculosis.

Figuur 2: Zure snelle mycobacteriën

Deze zure snelkleuring werd ontwikkeld door Paul Ehrlich in 1882. Ehrlich's zure snelle techniek werd gemodificeerd door Ziehl-Neelsen en wordt nu vaker gebruikt. Bij de zure snelkleurende procedure zijn drie verschillende reagentia betrokken. Carbol fuschin wordt gebruikt als de primaire vlek. Zure alcohol wordt gebruikt als het ontkleurende middel. Methyleenblauw wordt gebruikt als tegenkleuring. De kleuringsprocedure wordt als volgt uitgevoerd.

De primaire vlek (carbol fuchsin) wordt op het vaste preparaat op de glaasje aangebracht (alle cellen worden rood gekleurd).
De dia wordt verwarmd door 5 minuten te stomen, waardoor de vlekken goed in de cellen worden gedreven.
Vervolgens wordt de ontkleuringsoplossing toegevoegd (dit verwijdert de rode kleurstof uit alle cellen behalve de zuurvaste bacteriën).
Methyleenblauw wordt toegevoegd als tegenkleuring (het kleurt alle ontkleurde bacteriecellen).
Zure, snelle bacteriën blijven rood, terwijl niet-zure, snelle bacteriën in blauw kleuren.

Wat zijn de overeenkomsten tussen Gramkleuring en Acid Fast?

Gramkleuring en Acid Fast zijn twee differentiële kleuringstechnieken.
Beide technieken categoriseren bacteriën in twee groepen.
Beide technieken gebruiken twee vlekken en één ontkleuring.

Wat is het verschil tussen Gramkleuring en Acid Fast?

Gramvlek versus zuur snel
Gramkleuring is een differentiële kleuringstechniek, die bacteriën in twee groepen Gram-positieve bacteriën en Gram-negatieve bacteriën scheidt.	Acid Fast-kleuring is een differentiële kleuring die wordt gebruikt om zuurvaste organismen te identificeren van niet-zure snelle organismen.
Primaire vlek
Kristalviolet is de veelgebruikte primaire kleuring bij gramkleuring.	Carbol fuchsine is de primaire vlek die wordt gebruikt bij snel zuur.
Ontkleuren Agent
95% alcohol wordt gebruikt als ontkleuringmiddel in gramkleuring.	Zure alcohol wordt gebruikt als een ontkleurende stof in zuur snel.
Contrakleuring
Gram-kleuring gebruikt safranin als de tegenkleuring.	Zure, snelle vlek gebruikt methyleenblauw als tegenkleuring.
observatie
Gram-negatieve bacteriën worden waargenomen in de pickkleur en gram-positieve bacteriën worden waargenomen in paarse kleur.	Zure Snelle bacteriën worden in rode kleur waargenomen en niet-zure snelle bacteriën worden in blauwe kleur waargenomen.

Samenvatting - Gramkleuring versus zuur snel

Visualisatie van micro-organismen in levende toestand is moeilijk. Daarom worden biologische vlekken en kleuringsprocedures op grote schaal gebruikt om hun eigenschappen te bestuderen. Differentiële kleuring is een type kleuringstechniek die wordt gebruikt om bacteriën te differentiëren. Gramkleuring en zure snelle kleuring zijn twee differentiële kleuringstechnieken. Gramkleuring onderscheidt gram-negatieve bacteriën en gram-positieve bacteriën op basis van de dikte van hun celwanden. Zure, snelle kleuring differentieert zuurvaste bacteriën van niet-zure snelle bacteriën op basis van het mycolzuurgehalte in de celwand. Dit is het verschil tussen zuur-snel en gram-kleuring.

Download de PDF-versie van Gram Stain versus Acid Fast

U kunt de PDF-versie van dit artikel downloaden en gebruiken voor offline doeleinden, zoals per citaatnotitie. Download hier de PDF-versie Difference Between Gram Stain and Acid Fast.

Referenties:

1. Aryal, Sagar. "Acid-Fast Stain-Principle, Procedure, Interpretation and Examples." Online Microbiology Notes. N.p., 08 mei 2017. Web. Beschikbaar Hier. 20 juli 2017.
2. Differentiële vlekken voor het identificeren van bacteriën: Gram, zuurbestendig en endospore. N.p., n.d. Web. Beschikbaar Hier. 20 juli 2017.

Afbeelding met dank aan:

1. "Lymfeklier - Atypische mycobacteriële infectie (MAI) - AFB-vlek" door Yala Rosen (CC BY-SA 2.0) via Flickr
2. "Gramkleuring 01" door Y tambe - Y tambe's bestand (CC BY-SA 3.0) via Commons Wikimedia

Microbiologie