Verschil tussen PCR en real-time PCR

PCR vs Real-time PCR

PCR of polymerase kettingreactie is een revolutionaire ontdekking in de moderne moleculaire biologie, die voor het eerst werd ontwikkeld door de chemicus Kary Mullis in 1983. Het maakt het mogelijk een enkele sequentie in een complex DNA te amplificeren voor analyse. Het basisidee van de PCR is dat twee primers, die complementair zijn aan de tegenovergestelde strengen van een DNA-sequentie, op elkaar zijn gericht; de primers produceren complementaire strengen die elk de andere primer bevatten. Daarom is het resultaat een grote hoeveelheid van een sequentie die overeenkomt met het DNA dat tussen de twee primers ligt. DNA-polymerase-enzym wordt gebruikt om de primers in PCR uit te breiden. DNA-polymerase is een thermostabiel enzym en heeft het vermogen om te overleven bij hoge temperaturen (94 tot 95 ° C) die worden gebruikt voor denaturatie van template-DNA.

De PCR omvat drie stappen, namelijk herhaalde rondes van denaturatie, annealing van primers en synthese van DNA. Een thermocycler-machine wordt gebruikt om deze reactie uit te voeren, zodat deze kan worden geprogrammeerd om de temperaturen snel en nauwkeurig te veranderen. Toepassingen van de PCR zijn strafrechtelijk onderzoek, DNA-vingerafdruk, detectie van pathogenen en analyse van DNA van vroege menselijke soorten.

Wat is conventionele PCR?

Er zijn drie hoofdfasen van conventionele PCR, namelijk; DNA-amplificatiestadium, scheiding van PCR en detectie van producten. Scheiding van DNA-segmenten wordt typisch gedaan door agarosegelelektroforese. De producten worden vervolgens gekleurd met etheiduim bromide. Ten slotte wordt detectie bereikt door visualisatie van banden op gels onder UV-licht. Daarom worden de eindresultaten van conventionele PCR niet uitgedrukt als getallen. Normaal gesproken kan de conventionele PCR slechts één enkele parameter detecteren.

Wat is Realtime PCR?

Real-time PCR kan de amplificatie van producten detecteren, omdat de producten worden gesynthetiseerd. Met de ontwikkeling van technologie is PCR een zeer populaire techniek geworden, vooral voor de detectie en identificatie van bacteriën in voedingsmiddelen. De real-time PCR maakt gebruik van een florescent kleurstofsysteem en thermocycler uitgerust met fluorescentiedetectievermogen.

Wat is het verschil tussen conventionele PCR en real-time PCR?

• Conventionele PCR is meer tijdrovend omdat het gebruik maakt van gelelektroforese om de geamplificeerde PCR-producten te analyseren. Daarentegen is real-time PCR minder tijdrovend omdat het amplificaties tijdens de vroege fasen van de reactie kan detecteren.

• Real-time PCR verzamelt gegevens in de exponentiële groeifase van PCR, terwijl traditionele PCR gegevens verzamelt aan het eindpunt van de reactie.

• De resultaten van het eindpunt van de conventionele PCR zijn mogelijk niet erg nauwkeurig, maar de resultaten van de real-time PCR zijn zeer nauwkeurig.

• Realtime PCR is gevoeliger dan conventionele PCR.

• Conventionele PCR heeft een zeer slechte resolutie, terwijl real-time PCR zeer kleine veranderingen kan detecteren vanwege de hoge resolutie.

• Eindpuntdetectie van conventionele PCR heeft een kort dynamisch bereik, terwijl real-time PCR-detectie een breed dynamisch bereik heeft.

• In tegenstelling tot conventionele PCR, worden geautomatiseerde detectietechnieken gevonden in real-time PCR.

• Conventionele PCR is zeer geavanceerd en arbeidsintensief meer dan real-time PCR.

• In tegenstelling tot real-time PCR, kan conventionele PCR geen onderscheid maken tussen dode en levende bacteriën.

• Real-time PCR maakt gebruik van fluorescerend kleurstofsysteem om de producten te detecteren, terwijl conventionele PCR ethidiumbromide en UV-licht gebruikt om banden in het agarosegelmedium zichtbaar te maken.