Verschil tussen dunne laag papier en kolomchromatografie

Belangrijkste verschil - Papier versus dunne laag vs Kolom chromatografie

Papieren chromatografie, dunnelaagchromatografie en kolomchromatografie zijn drie typen chromatografische technieken. De belangrijk verschil tussen papierchromatografie, dunnelaagchromatografie en kolomchromatografie zijn gebaseerd op het type stationaire fase dat wordt gebruikt in de chromatografietechniek. Papierchromatografie maakt gebruik van een cellulosepapier als stationaire fase, dunne laagchromatografie gebruikt alumina of silicagel als stationaire fase, terwijl kolomchromatografie een kolom gebruikt die is gepakt met een geschikt matrixmateriaal als stationaire fase.

Bij het proces van scheiding en identificatie van biomoleculen zoals eiwitten en koolhydraten, is chromatografie een belangrijke biofysische techniek die wordt gebruikt. Chromatografie scheidt verbindingen op basis van hun oplosbaarheid, grootte en lading. Op basis van het scheidingsmechanisme gebruikt chromatografie mechanismen zoals ionenuitwisseling, absorptie, partitie en grootte-uitsluiting en zijn er drie chromatografische technieken; namelijk papier, dunne laag en kolomchromatografie. Papieren chromatografie is gebaseerd op de adsorptie en oplosbaarheid van de verbinding in vaste en vloeibare vorm, en het gebruikt een cellulosepapier als de stationaire fase. Dunnelaagchromatografie is gebaseerd op vast-vloeistofadsorptie van moleculen. Het heeft een stationaire fase die meestal wordt gemaakt van aluminiumoxide of silicagel en de mobiele fase die het oplosmiddel is. Kolomchromatografie maakt gebruik van een kolom die is gepakt met een matrix die wordt gebruikt om moleculen voornamelijk te scheiden op basis van hun grootte, affiniteit of de lading ervan.

INHOUD

1. Overzicht van chromatografie en belangrijkste verschil
2. Wat is Paper Chromatography
3. Wat is thin layer-chromatografie
4. Wat is kolomchromatografie
5. Overeenkomsten tussen papier, dunne laag en kolomchromatografie
6. Vergelijking zij aan zij - Papier versus dunne laag versus kolomchromatografie in tabelvorm
7. Samenvatting

Wat is Paper Chromatography?

Papierchromatografie is het eenvoudigste type chromatografie dat wordt gebruikt en wordt niet gebruikt voor uitgebreid onderzoek. Het wordt voornamelijk gebruikt in studentenlaboratoria om biomoleculen te identificeren, zoals aminozuren en koolhydraten die in mengsels voorkomen. Papierchromatografie maakt gebruik van een stationaire fase die is gemaakt van cellulosepapier of Whatman-filtreerpapier en een mobiele fase die gewoonlijk wordt bereid met organische oplosmiddelen zoals n-butanol, enz. De stationaire fase is verzadigd met water, waardoor de stationaire fase vloeibaar wordt. Dus, wanneer de verbindingen worden gespot en toegestaan om te lopen in de aanwezigheid van de mobiele fase, afhankelijk van de oplosbaarheid van de verbindingen, worden ze gescheiden. Aldus kan na de ontwikkeling van het chromatogram kleuring worden uitgevoerd om het verloop van de lengte van elke verbinding te bepalen. De retentiefactor kan daardoor worden berekend.

Figuur 01: Papierchromatografie

Papieren chromatografie kan verder worden geclassificeerd als oplopende papierchromatografie en dalende papierchromatografie afhankelijk van de richting van het lopend oplosmiddel.

Wat is thin layer-chromatografie?

Dunnelaagchromatografie of TLC is een veel gebruikte techniek om verschillende aminozuren te identificeren die aanwezig zijn in een mengsel of voor de identificatie van eiwitten. De techniek van scheiding is gebaseerd op de adsorptie van vaste stof-vloeistof. Tijdens dunnelaagchromatografie wordt een plaat gemaakt van aluminiumoxide of silicagel als de stationaire fase gebruikt. Het oplosmiddelmengsel varieert van de eis en kan verschillende combinaties van organische verbindingen zoals n-butanol, azijnzuur en water gebruiken om het oplosmiddel te bereiden. De te scheiden verbindingen worden op de plaat aangebracht en ondergedompeld in het oplosmiddelmengsel. Als het oplosmiddel eenmaal oploopt op basis van de capillaire werking die door de plaat wordt gegeven, bewegen de op de plaat gespatte verbindingen ook afhankelijk van hun oplosbaarheid in het oplosmiddel.

Figuur 02: Thin Layer Chromatography

De detectie van de vlekken na het chromatogram wordt uitgevoerd door verschillende kleuringsprocedures. Sommigen gebruiken ninhydrinekleuring die een tamelijk toxische kleuring is. Moderne dunne laag chromatogrammen gebruiken fluorescentietechnieken om het chromatogram na de run te bekijken. Afhankelijk van de afstanden die het heeft afgelegd, kan de retentietijd van elke verbinding worden berekend. Dit kan worden gebruikt om het type verbinding te identificeren dat is gescheiden op basis van het gebruikte mengsel. TLC wordt hoofdzakelijk gebruikt om aminozuren in een eiwitmengsel te identificeren en ook om verschillende soorten monosacchariden die in een mengsel aanwezig zijn te scheiden.

Wat is kolomchromatografie?

Kolomchromatografie is een brede term die wordt gebruikt om vele soorten chromatografietechnieken te beschrijven die de op kolommen gebaseerde scheidingsmethode gebruiken. Bij kolomchromatografie wordt een fysieke kolom gebruikt met een verpakkingsmateriaal om de verbindingen te scheiden. De scheiding kan gebaseerd zijn op verschillende fysische eigenschappen die door de verbindingen worden vertoond. Deze eigenschappen kunnen de lading, grootte, 3D-conformatie en bindingscapaciteit zijn, enz. De kolom die is gepakt met het matrixmateriaal fungeert dus als de stationaire fase en de wasbuffer die op de kolom wordt toegepast fungeert als de mobiele fase.

Als de moleculen worden gescheiden op basis van de grootte, wordt het verpakkingsmateriaal zodanig verpakt dat er poriën achterblijven waar de verbindingen doorheen kunnen reizen. Dus, de grotere moleculen die niet door de poriën kunnen stromen, worden eerst geëlueerd, terwijl de kleinere moleculen veel langere tijd nodig hebben om te elueren.

Figuur 03: Kolomchromatografie

Als de moleculen worden gescheiden op basis van hun lading, bevat de stationaire fase een anion of kationenwisselaar waaraan de verbindingen worden aangetrokken op basis van hun lading. Aldus zullen tijdens de wasstap de niet-gebonden verbindingen worden geëlueerd. Na toevoeging van de elutiebuffer zullen de gebonden geladen verbindingen worden geëlueerd. De detectie van deze eluenten is meestal gebaseerd op spectrofotometrische technieken.

Wat zijn de overeenkomsten tussen dunne laag papier en kolomechromatografie?

Alle papier dunne laag en kolomchromatografie drie technieken worden gebruikt voor de scheiding van biomoleculen zoals aminozuren, eiwitten en koolhydraten.
Paper Thin Layer en Column Chromatography-technieken hebben een mobiele fase en een stationaire fase.
Paper Thin Layer en Column Chromatography-technieken gebruiken biofysische mechanismen voor scheiding.

Wat is het verschil tussen Dun papier en Kolomchromatografie?

Papier versus dunne laag versus kolomchromatografie
Papierchromatografie	Papierchromatografie is een chromatografietechniek om verbindingen te scheiden op basis van de vloeistof-vloeistof adsorptie en oplosbaarheid van de verbinding. Het gebruikt een cellulosepapier als stationaire fase.
Dunne laagchromatografie	Dunnelaagchromatografie is een andere chromatografische techniek op basis van vaste stof-vloeistof adsorptie van moleculen. Het heeft een stationaire fase gemaakt van aluminiumoxide of silicagel en een oplosmiddel als de mobiele fase, die het oplosmiddel is.
Kolomchromatografie	Kolomchromatografie maakt gebruik van een kolom die is gepakt met een matrix die wordt gebruikt om moleculen voornamelijk te scheiden op basis van hun grootte, affiniteit of de lading ervan.
Stationaire fase
Papierchromatografie	Papier gemaakt van nitrocellulose van Whatman wordt gebruikt als de stationaire fase in de papierchromatografie.
Dunne laagchromatografie	Alumina of silicagel wordt gebruikt als de stationaire fase van de dunnelaagchromatografie.
Kolomchromatografie	Een kolom gepakt met geschikt pakkingsmateriaal wordt gebruikt als de stationaire fase in de kolomchromatografie.
Mobiele fase
Papierchromatografie	Lopend oplosmiddel is de mobiele fase van de papierchromatografie.
Dunne laagchromatografie	Lopend oplosmiddel is de mobiele fase van de dunnelaagchromatografie.
Kolomchromatografie	Wasbuffer is de mobiele fase van de kolomchromatografie.
Mechanismen gebruikt voor scheiding
Papierchromatografie	Papieren chromatografie is gebaseerd op vast-vloeistofabsorptie.
Dunne laagchromatografie	Dunnelaagchromatografie is gebaseerd op vast-vloeistofabsorptie.
Kolomchromatografie	Kolomchromatografie is gebaseerd op grootte-uitsluiting, lading en vorm.
Elution Buffer
Papierchromatografie	Niet vereist door papierchromatografie.
Dunne laagchromatografie	Niet vereist voor dunnelaagchromatografie.
Kolomchromatografie	Vereist bij kolomchromatografie.
opsporing
Papierchromatografie	Kleuring en door de retentiefactor te bepalen.
Dunne laagchromatografie	Kleuring en door de retentiefactor te bepalen.
Kolomchromatografie	Spectrofotometrische bepaling.

Samenvatting - Papier dunne laag vs Kolom chromatografie

Papieren chromatografie, TLC en kolomchromatografie zijn scheidingstechnieken die worden gebruikt om biomoleculen te scheiden, zoals eiwitten, aminozuren en koolhydraten (voornamelijk monosacchariden). Papierchromatografie gebruikt een cellulosepapier als de stationaire fase en het scheidingsmechanisme is gebaseerd op adsorptie van vaste en vloeibare stoffen. TLC maakt ook gebruik van adsorptiemechanismen voor vaste en vloeibare stoffen. De moleculen worden gescheiden op de stationaire fase, afhankelijk van hun oplosbaarheid in de mobiele fase. Kolomchromatografie gebruikt fysische eigenschappen zoals grootte, vorm, lading en het molecuulgewicht van de verbinding om te scheiden. De kolom die is gepakt met het matrixmateriaal werkt als de stationaire fase, terwijl de wasbuffer werkt als de oplosmiddelfase. Dit is het verschil tussen een dunne laag en kolomchromatografie.

Referentie:

1. Clark, Jim. "DUNLAGERCHROMATOGRAFIE." Dunne laagchromatografie, 2007. Beschikbaar Hier
2. Koskun, Ozlem. "Separation Techniques: Chromatography." Northern Clinics of Istanbul, Kare Publishing, 2016. Beschikbaar Hier

Afbeelding met dank aan:

1. 'Chromatografietank' (CC BY-SA 3.0) via Commons Wikimedia
2.'Tlc reeks'door Quantockgoblin, (Public Domain) via Commons Wikimedia
3. 'Chrom Chromatography' (Public Domain) via Commons Wikimedia

Biochemie