Verschil tussen HPLC en HPTLC
Share
Belangrijkste verschil - HPLC versus HPTLC
Het belangrijkste verschil tussen HPLC en HPTLC is dat HPLC maakt kwantitatieve scheiding van componenten in een monster mogelijk, terwijl HPTLC geen kwantitatieve scheiding van componenten in een monster toestaat.
Chromatografie is een fysieke scheidingsmethode die wordt gebruikt om de componenten in een mengsel te scheiden en te identificeren. Zowel HPLC als HPTLC zijn chromatografische technieken. HPLC is hoge prestatie vloeistofchromatografie. HPTLC is high performance dunnelaagchromatografie.
INHOUD
1. Overzicht en belangrijkste verschil
2. Wat is HPLC
3. Wat is HPTLC
4. Vergelijking zij aan zij - HPLC versus HPTLC in tabelvorm
5. Samenvatting
Wat is HPLC?
HPLC is krachtige vloeistofchromatografie. Het is een analytische techniek die wordt gebruikt om componenten in een mengsel te scheiden, identificeren en kwantificeren. In deze techniek wordt het monster opgelost in een geschikt oplosmiddel. Vervolgens wordt het oplosmiddel met het monster door een pomp geleid met een gegeven druk. De pomp is gevuld met vast adsorbensmateriaal. Dan binden sommige componenten sterk aan het absorberende materiaal, terwijl andere componenten losjes binden. Hierdoor hebben de componenten verschillende stroomsnelheden door de pomp. Daarom kunnen de componenten eenvoudig worden gescheiden.
Afbeelding 01: een HPLC-systeem
Het adsorberende materiaal dat de pomp vult, staat bekend als de stationaire fase. Het oplosmiddel met het opgeloste monster is bekend als de mobiele fase. De pomp die in deze techniek wordt gebruikt, wordt de kolom genoemd. De kolom is gevuld met een adsorberend materiaal, meestal siliciumoxidedeeltjes. De grootte van deze deeltjes kan variëren van 2-50 μm. Het scheidingsproces wordt beïnvloed door de samenstelling van de mobiele fase en de temperatuur van het systeem. De interacties tussen de stationaire fase en de component in het monster kunnen hydrofobe interacties zijn, dipool-dipool interacties, ionische binding, enz..
De werkingsdruk van de HPLC is aanzienlijk hoger dan die van de traditionele vloeistofchromatografie. Het ligt rond de 50-350 bar. Het verschil tussen vloeistofchromatografie en HPLC is dat bij vloeistofchromatografie het monster onder invloed van de zwaartekracht door de kolom valt terwijl in HPLC het monster door de kolom onder druk wordt gezet. De grootte van de kolom en de absorberende deeltjes zijn ook erg klein in vergelijking met de traditionele vloeistofchromatografie. De resolutie gegeven door de HPLC-techniek is echter superieur.
Wat is HPTLC?
HPTLC is hoogpresterende dunnelaagchromatografie. Het is de geavanceerde en geautomatiseerde vorm van traditioneel TLC. Deze techniek biedt een efficiënte oplossing in een korte tijdsperiode. In deze analysemethode kunnen het monster en een referentie tegelijkertijd worden geanalyseerd, waardoor het monster met de referentie kan worden vergeleken. Het geeft een verbeterde analytische nauwkeurigheid dan andere chromatografische technieken. De tijd die nodig is voor de analyse is minder. De techniek is een goedkope techniek.
Figuur 02: Een analyse van kleurstoffen met behulp van HPTLC
De HPTLC-methode is een eenvoudig proces en de monstervoorbereidingsstap is ook geëlimineerd (in de traditionele TLC wordt de monstervoorbereidingsstap voorafgaand aan de scheiding opgenomen.Deze stap omvat reiniging en verrijking). Het oplosmiddel kan direct worden gebruikt zonder enige voorbehandeling, hoewel andere chromatografische technieken voorbehandelingen vereisen zoals ontgassing, filtratie, enz..
Het adsorberende materiaal dat wordt gebruikt in HPTLC is silica met zeer kleine deeltjesgroottes. In traditionele TLC is de deeltjesgrootte van silica 5 - 20 μm, terwijl deze in HPTLC 4 - 8 μm is. Het monster wordt aangebracht op de HPTLC-plaat met behulp van een applicator. Het geeft een uniforme en veilige toepassing. Vervolgens worden de platen geplaatst in een kamer met de mobiele fase. De kamer moet verzadigd zijn met de damp van de mobiele fase. Na het HPTLC-proces kunnen de vlekken die zijn verplaatst worden gedetecteerd. Bij het detecteren van de vlekken op de plaat, gebruikt de HPTLC-techniek een geschikt UV-gebied of een jodiumkamer.
Wat is het verschil tussen HPLC en HPTLC?
HPLC versus HPTLC | |
| HPLC is hoge prestatie vloeistofchromatografie. | HPTLC is high performance dunnelaagchromatografie. |
| Techniek | |
| In HPLC wordt de mobiele fase met het oplosmiddel door een kolom geleid die is gevuld met de stationaire fase. | In HPTLC wordt het monster op een TLC-plaat gespot en in een kamer geplaatst die de mobiele fase bevat; dan mag het monster naar boven migreren, samen met de mobiele fase. |
| Meting | |
| In HPLC worden de verschillen tussen stroomsnelheden van componenten door de kolom gebruikt om de componenten in het monster te scheiden. | In HPTLC worden de verschillen tussen de afgelegde afstanden door elke component in het monster gebruikt om de componenten in het monster te scheiden. |
| Kwantitatieve scheiding | |
| HPLC maakt kwantitatieve scheiding van componenten in een monster mogelijk. | HPTLC staat geen kwantitatieve scheiding van componenten in een monster toe. |
Samenvatting - HPLC versus HPTLC
HPLC en HPTLC zijn twee chromatografische technieken. Het belangrijkste verschil tussen HPLC en HPTLC is dat HPLC kwantitatieve scheiding van componenten in een monster mogelijk maakt, terwijl HPTLC geen kwantitatieve scheiding van componenten in een monster toestaat.
Referentie:
1. "High-Performance Liquid Chromatography." Wikipedia, Wikimedia Foundation, 10 april 2018, Beschikbaar Hier.
2. "HPTLC." LinkedIn SlideShare, 30 mei 2011, Beschikbaar Hier.
Afbeelding met dank aan:
1. "HPTLCplatetoMS" door Kjaergaard op Engelse Wikipedia - Overgezet van en.wikipedia naar Commons (Public Domain) via Commons Wikimedia
2. "Hplc" door PD Dr. rer. nat. habil. Gertrud Morlock Associate Professor (Privatdozentin) University of HohenheimInstitute of Food Chemistry - G. Morlock, C. Oellig, CAMAG Bibliography Service 103 (2009) via Commons Wikimedia
