Verschil tussen omgekeerde fase en normale fase HPLC

De belangrijk verschil tussen omgekeerde fase en normale fase HPLC is dat de Omgekeerde fase HPLC gebruikt een polaire stationaire fase en een minder polaire mobiele fase terwijl de normale fase HPLC een niet-polaire stationaire fase en een polaire mobiele fase gebruikt.

De normale fase HPLC is de oudste techniek van HPLC die Tswett gebruikte bij zijn scheidingen van plantenextracten; hij gebruikte krijt in een glazen kolom. Dit was de klassieke manier van chromatografie die leidde tot het noemen van de "normale" techniek. Reversed-fase HPLC is daarentegen het tegenovergestelde van de normale techniek, die wetenschappers de laatste tijd ontwikkelden.

INHOUD

1. Overzicht en belangrijkste verschil
2. Wat is Reverse Phase HPLC
3. Wat is normale fase HPLC
4. Vergelijking zij aan zij - Omgekeerde fase versus normale fase HPLC in tabelvorm
5. Samenvatting

Wat is Reverse Phase HPLC?

Omgekeerde fase HPLC is een chromatografische techniek waarbij we een hydrofobe stationaire fase gebruiken. Van alle HPLC-methoden gebruiken we deze methode voor ongeveer 70% vanwege de brede toepasbaarheid en reproduceerbaarheid. De stationaire fase is niet-polair en de mobiele fase is polair.

Meestal gebruiken wetenschappers een waterig mengsel van water met een mengbaar, polair organisch oplosmiddel, zoals acetonitril of methanol als de mobiele fase. Daarom werken de analyten samen met de niet-polaire stationaire fase.

Wat is normale fase HPLC?

Normale fase HPLC is een chromatografische techniek waarbij we een hydrofiele stationaire fase gebruiken. Het is de traditionele methode van HPLC, hoewel we het niet zoveel gebruiken. De stationaire fase is polair en de mobiele fase is niet-polair. Wat nog belangrijker is, de mobiele fase van deze techniek is 100% organisch. Het betekent dat hiervoor geen water wordt gebruikt.

Figuur 01: Een monsterprofiel voor normale fase en omgekeerde fase HPLC-chromatogrammen volgens de polariteit van componenten in de analyt.

Kenmerkend bevat de stationaire fase silica, cyaan, diol, amino-gebonden fasen, enz. Mobiele fasen omvatten organische oplosmiddelen zoals hexaan, ethylacetaat, enz. Deze techniek baseert zich op de retentie van oplosmiddel of analytmoleculen op de polaire stationaire fase..

Wat is het verschil tussen omgekeerde fase en normale fase HPLC?

Omgekeerde fase HPLC is een chromatografische techniek waarbij we een hydrofobe stationaire fase gebruiken. De stationaire fase van deze techniek is niet-polair. De stationaire fase is niet-polair terwijl de mobiele fase polair is. Bovendien gebruiken wetenschappers een waterig mengsel van water met een mengbaar, polair organisch oplosmiddel, zoals acetonitril of methanol als de mobiele fase in HPLC met omgekeerde fase. Terwijl de normale fase HPLC een chromatografische techniek is waarbij we een hydrofiele stationaire fase gebruiken. De stationaire fase van deze techniek is polair. De stationaire fase is polair terwijl de mobiele fase niet-polair is. Daarnaast gebruiken wetenschappers organische oplosmiddelen zoals hexaan, ethylacetaat, enz. Als de mobiele fase van normale fase HPLC. De onderstaande infographic presenteert het verschil tussen omgekeerde fase en normale fase HPLC in een tabelvorm.

Samenvatting - Reverse Phase versus normale fase HPLC

Omgekeerde fase en normale fase HPLC-technieken zijn twee vloeistofchromatografische technieken. Het verschil tussen omgekeerde fase en normale fase HPLC is dat omgekeerde fase HPLC een polaire stationaire fase en een minder polaire mobiele fase gebruikt terwijl normale fase HPLC een niet-polaire stationaire fase en een polaire mobiele fase gebruikt.

Referentie:

1. Wateren. "HPLC-scheidingsmodi." HPLC - High Performance Liquid Chromatography Explained: Waters. Beschikbaar Hier  
2. "Normale fase vloeistofchromatografie voor de scheiding van isomeren en verbindingen die instabiel zijn in waterige omgeving." Normal_Phase_LC. Beschikbaar Hier