Wat is het verschil tussen Single Digested Plasmid en Double Digested Plasmid

De grootste verschil tussen enkelvoudig gedigereerd plasmide en dubbel gedigesteerd plasmide is dat enkelvoudige restrictie-enzymen resulteren in een enkel verteerd plasmide terwijl twee verschillende soorten restrictie-enzymen resulteren in een dubbel gedigereerd plasmide. Verder kan de insertie van het vreemde DNA-fragment in beide oriëntaties optreden met enkel gedigesteerde plasmiden, terwijl de insertie van het vreemde DNA-fragment alleen in de juiste oriëntatie optreedt met dubbel-verteerde plasmiden..

Eénvoudig verteerd plasmide en dubbel gedigesteerd plasmide zijn twee soorten plasmiden die in de recombinante DNA-technologie worden gebruikt om recombinant DNA te produceren.

Key Areas Covered

1. Wat is een Single Digested Plasmid
     - Definitie, zelfligatie, oriëntatie
2. Wat is een Double Digested Plasmid
     - Definitie, dubbele spijsvertering, oriëntatie
3. Wat zijn de overeenkomsten tussen Single Digested Plasmid en Double Digested Plasmid
     - Overzicht van gemeenschappelijke functies
4. Wat is het verschil tussen Single Digested Plasmid en Double Digested Plasmid
     - Vergelijking van belangrijke verschillen

Sleutelbegrippen

Double Digested Plasmid, Double Digestion, Orientation, Recombinant Plasmid, Single Digested Plasmid, Single Digestion

Wat is een Single Digested Plasmid

Enkelvoudig verteerde plasmiden zijn een type plasmiden die alleen met een enkel restrictie-enzym worden gedigereerd. Vandaar dat dit proces een enkele vertering wordt genoemd. In het algemeen bevatten plasmiden die in recombinante DNA-technologie worden gebruikt slechts een enkele restrictieplaats voor een bepaald restrictie-enzym. Daarom maakt enkele digestie het cirkelvormige plasmide lineair, wat een enkel DNA-fragment oplevert. De twee uiteinden van dit DNA-fragment zijn compatibel met elkaar; daarom kunnen ze zelfligatie ondergaan tijdens de daaropvolgende ligatie met het insert. 

Figuur 1: Single Digested Plasmid

Hier moet het insert ook worden verteerd met hetzelfde restrictie-enzym om compatibele uiteinden met het plasmide te produceren. Daarom vindt de ligatie plaats in twee mogelijke oriëntaties: in de oriëntatie van 5 'naar 3' en oriëntatie van 3 'naar 5'. De inserts met dezelfde oriëntatie als het promotergebied kunnen echter transcriptie ondergaan. Dus deze oriëntatie staat bekend als de juiste oriëntatie. Alvorens verder te gaan, moeten de recombinante plasmiden met de juiste oriëntatie worden geselecteerd door de getransformeerde kolonies te screenen, hetzij door PCR of biochemische assays..

Wat is een Double Digested Plasmid

Dubbel verteerde plasmiden zijn de plasmiden die dubbele digestie ondergaan met twee restrictie-enzymen. Hier kan deze reactie in een enkele buis worden uitgevoerd. De restrictieplaatsen voor beide digesties treden op binnen de restrictieherkenningsplaats in het plasmide. Vandaar dat dubbele digestiereactie ook resulteert in een enkel DNA-fragment. Maar elk van de twee uiteinden wordt geproduceerd door een ander restrictie-enzym. Daarom zijn deze uiteinden niet compatibel met elkaar en ondergaan ze geen zelfligatie.

Figuur 2: Double Digested Plasmid

Het belangrijkste is dat het insert in de juiste oriëntatie kan worden geligeerd met dubbel-verteerde plasmiden door de uiteinden van het insert te digereren om in de juiste oriëntatie te ligeren. Daarom geven dubbel gedigesteerde plasmiden alleen de recombinante plasmiden met de juiste oriëntatie, hetgeen de daaropvolgende selectie van de oriëntatie onnodig maakt. Dit bespaart tijd omdat het een volledige stap uit de recombinant DNA-productieprocedure vermindert.

Overeenkomsten tussen Single Digested Plasmid en Double Digested Plasmid

• Eénvoudig verteerd plasmide en dubbel gedigesteerd plasmide zijn twee typen plasmiden die worden gebruikt in recombinant DNA-technologie.
• Zowel enkelvoudige digestie als dubbele digestie kan worden gedaan door een eenstapsreactie.
• Ook is in beide het vreemde DNA-fragment ingevoegd tussen de twee uiteinden van de gedigereerde plasmiden.
• Bovendien leveren zowel enkele als dubbele digestie van een plasmide een enkel DNA-fragment op, terwijl twee DNA-fragmenten optreden wanneer een recombinant plasmide wordt verteerd.

Verschil tussen Single Digested Plasmid en Double Digested Plasmid

Definitie

Eén gedigereerd plasmide verwijst naar een plasmide gedigesteerd door een enkel restrictie-enzym, terwijl dubbel gedigesteerd plasmide verwijst naar een plasmide gedigereerd door twee verschillende restrictie-enzymen. Deze definities verklaren het belangrijkste verschil tussen enkelvoudig gedigereerd plasmide en dubbel gedigereerd plasmide.

Loopt af

In enkelvoudig gedigereerde plasmiden produceren digestie met hetzelfde restrictie-enzym beide uiteinden, terwijl in dubbel-gedigereerde plasmiden, digestie met een verschillend restrictie-enzym elk uiteinde produceert. Daarom is dit een belangrijk belangrijk verschil tussen enkelvoudig gedigereerd plasmide en dubbel gedigereerd plasmide.

Self-Ligatie

Verder is zelfligatie een belangrijk hoofdverschil tussen enkelvoudig gedigereerd plasmide en dubbel gedigereerd plasmide. De uiteinden van enkelvoudig gedigereerde plasmiden zijn compatibel met elkaar voor zelfligatie, terwijl de uiteinden van dubbel gedigesteerde plasmiden niet compatibel zijn met elkaar voor zelfligatie.

Belang

Bovendien kan insertie van vreemd DNA-fragment voorkomen in beide oriëntaties in de enkelvoudig gedigereerde plasmiden, terwijl de insertie van vreemd DNA-fragment kan worden uitgevoerd in de juiste oriëntatie in de dubbel-gedigereerde plasmiden..

Typen recombinante plasmiden

Een single-verteerd plasmide kan drie typen plasmiden produceren: twee recombinante plasmiden met tegengestelde oriëntaties en een zelf-geligeerd plasmide zonder een insert. Ondertussen kan een dubbel gedigereerd plasmide slechts één type recombinant plasmide produceren, dat in de juiste oriëntatie is. Aldus is dit een ander belangrijk verschil tussen enkelvoudig gedigereerd plasmide en dubbel gedigereerd plasmide. 

Tijd besparen

De recombinante fragmenten van enkelvoudig gedigereerde plasmiden moeten worden geselecteerd op hun juiste oriëntatie, terwijl de dubbel gedigereerde plasmiden zorgen voor de juiste oriëntatie van het vreemde DNA-fragment. Daarom besparen dubbel gedigesteerde plasmiden tijd in de recombinante DNA-technieken, niet in enkelvoudig gedigereerde plasmiden.

Conclusie

Enkelvoudig verteerde plasmiden worden gedigereerd met een enkel restrictie-enzym, wat resulteert in compatibele uiteinden met zelfligatie. Bovendien kan hun ligatie met het vreemde DNA-fragment in beide oriëntaties plaatsvinden. Daarom moeten recombinante plasmiden met de juiste oriëntatie worden geselecteerd. Aan de andere kant worden dubbel gedigereerde plasmiden gedigereerd met twee verschillende restrictie-enzymen. Daarom zijn de twee uiteinden niet compatibel voor zelfligatie. Bovendien kan het vreemde DNA-fragment in de juiste oriëntatie worden geligeerd met dubbel-gedigereerde plasmiden. Daarom is het belangrijkste verschil tussen enkelvoudig gedigereerd plasmide en dubbel gedigereerd plasmide het type digestie en de oriëntatie van het insert.

Referentie:

1. Griffiths AJF, Miller JH, Suzuki DT, et al. Een inleiding tot genetische analyse. 7e editie. New York: W.H. Freeman; 2000. Recombinant DNA maken. Beschikbaar Hier