Verschil tussen transiënte en stabiele transfectie

Belangrijkste verschil - Transiënte versus stabiele transfectie
 

Transfectie is een proces dat betrokken is bij de genoverdracht van eukaryotische cellen met behulp van chemische of fysische methoden. Transfectie kan worden geclassificeerd in de twee hoofdtypen transiënte transfectie en stabiele transfectie genoemd. Tijdens transiënte transfectie slaagt het gen van belang er niet in om te integreren met het gastheergenoom en wordt het tijdelijk in gastheer gedurende een korte termijn tot expressie gebracht terwijl, in stabiele transfectie, het gen van interesse integreert met het gastheergenoom en gedurende een lange tijd in meerdere generaties wordt onderhouden.s. Dit is het belangrijkste verschil tussen transiënte en stabiele transfectie. In beide gevallen is transfectie succesvol en worden genen tot expressie gebracht.

INHOUD
1. Overzicht en belangrijkste verschil
2. Wat is voorbijgaande transfectie
3. Wat is stabiele transfectie
4. Vergelijking zij aan zij - Transiënte versus stabiele transfectie
5. Samenvatting

Wat is voorbijgaande transfectie?

Transfectie is een belangrijk hulpmiddel voor het invoegen van genen in eukaryote cellen. Van de twee soorten transfectie is transiënte transfectie een gangbare manier van genoverdracht. Via een vector worden vreemde genen getransformeerd in gastheercellen. Zodra vreemd DNA de gastheercel binnengaat, heeft het twee opties. Het kan integreren met het gastheergenoom en repliceren, of binnen blijven zonder te integreren in het genoom. Voorbijgaande transfectie vertoont de tijdelijke expressie van de ingevoegde genen zonder te integreren in het gastheergenoom. Genen brengen het gecodeerde eiwit tot expressie en produceren het totdat de cel zich deelt. Vanwege het onvermogen van integratie kan het echter niet repliceren en toekomstige generaties binnengaan. Dit type transfectie is succesvol gedurende een korte tijdsperiode. Tijdens de celdeling of door een aantal andere factoren wordt vreemd DNA onderworpen aan degradatie. Transiënte transfectie wordt getoond wanneer het vreemde DNA de vorm heeft van sterk opgerold DNA.

Figuur 01: Transiënte transfectie

Wat is stabiele transfectie?

Stabiele transfectie toont succesvolle vreemde genintegratie in gastheergenoom. Zodra vreemd DNA de gastheercel binnentreedt, integreert een deel van het vreemde DNA zich met het gastheergenoom en wordt het een deel ervan. Vandaar dat vreemd DNA ook repliceert en doorgaat naar toekomstige generaties wanneer het gastheergenoom repliceert. Dit type transfectie is complex en zeldzaam. Vanwege de stabiele transfectie in het genoom wordt deze eigenschap echter gedurende een langere periode van verschillende generaties aangehouden.

Stabiele transfectie is een moeilijk proces en vereist een effectieve aflevering van DNA en celverwerving van het vreemde DNA in zijn genoom. Vandaar dat lineair DNA de stabiele transfectie bevordert dan cirkelvormig DNA. Een stabiele transfectiesnelheid is echter ongeveer één op de tien⁴ getransformeerde cellen. Stabiele transfectie kan worden waargenomen door de cotransformatie van een selecteerbare marker en het uitvoeren van de kunstmatige selectie op een medium.

Figuur 02: Stabiele transfectie

Wat is het verschil tussen transiënte en stabiele transfectie?

Voorbijgaande versus stabiele transfectie
Vreemd DNA is niet geïntegreerd in een gastheergenoom.	Vreemde DNA integreert met gastheergenoom en wordt een deel ervan.
Replicatie binnen de host
Transient getransfecteerde genen repliceren niet binnen de gastheer. Daarom worden genen niet doorgegeven aan volgende generaties.	Genen worden binnen de host gerepliceerd en doorgegeven aan toekomstige generaties.
Tijdsduur van de genexpressie
Genen worden uitgedrukt voor een eindige tijdsperiode en daarna worden ze vernietigd.	Genen worden onderdeel van het genoom en uitgedrukt in de generatie voor een lange periode.
Gebruik
Dit is nuttig voor het bestuderen van de effecten van kortetermijnexpressie van genen of genproducten.	Dit is nuttig voor het langdurig bestuderen van de effecten van genexpressies.
Detectie van de transfectie
Genen worden tot expressie gebracht en kunnen eenvoudig worden gedetecteerd door het inbrengen van een reportergen.	Stabiele transfectie kan gemakkelijk worden gedetecteerd door een selecteerbare marker in te voegen en door kunstmatige selectie op media te selecteren.
Voorval en proces
Transiënte transfectie is gebruikelijk en niet complex om uit te voeren.	Stabiele transfectie is zeldzaam in voorkomen en complex om uit te voeren.
Aard van het DNA
Sterke supercoiled DNA zijn geschikt voor transiënte transfectie.	Lineair DNA is geschikt voor stabiele transfectie.
toepassingen
Dit wordt gebruikt voor studies van gen-knockdown of silencing met remmende RNA's, eiwitproductie op kleine schaal	Dit wordt gebruikt voor de productie van eiwitten op een grootschalige farmacologische studie op langere termijn, gentherapie, onderzoek naar de mechanismen van genetische regulatie op de lange termijn.

Samenvatting - Transiënte versus stabiele transfectie

Transiënte en stabiele transfecties zijn twee soorten transfecties die worden getoond tijdens het gen dat overbrengt naar eukaryotische cellen door niet-virale systemen. Getransformeerd vreemd DNA is niet geïntegreerd met het gastheergenoom in transiënte transfectie, terwijl het met het gastheergenoom integreert in stabiele transfectie. Circulair opgerold DNA vertoont transiënte transfectie terwijl lineair DNA een voorkeur heeft voor stabiele transfectie. Dit is het verschil tussen transiënte en stabiele transfectie. Transiënte transfectie komt echter vaker voor en is eenvoudig in vergelijking met stabiele transfectie. Maar de selectie van een van de twee hangt af van het doel van de genoverdracht en de duur van het onderzoeksproject.

Referenties:
1. Condreay, J. Patrick, Sam M. Witherspoon, William C. Clay en Thomas A. Kost. "Transiënte en stabiele genexpressie in zoogdiercellen getransduceerd met een recombinante baculovirusvector." Proceedings van de National Academy of Sciences van de Verenigde Staten van Amerika. De Nationale Academie van Wetenschappen, 05 januari 1999. Web. 25 maart 2017
2. Kim, Tae Kyung en James H. Eberwine. "Transformatie van zoogdiercellen: het heden en de toekomst." Analytische en bioanalytische chemie. Springer-Verlag, aug. 2010. Web. 25 maart 2017