Verschil tussen SDS-pagina en Native Page

Belangrijkste verschil - SDS-pagina versus native Pagina
 

SDS en native page zijn twee soorten polyacrylamide gelelektroforese technieken die worden gebruikt in Molecular Biology. De belangrijk verschil tussen SDS-pagina en Native Page is het type polyacrylamidegel dat wordt gebruikt. Op SDS-pagina wordt daarom een ​​denaturerende gel gebruikt, moleculen worden gescheiden op basis van hun molecuulgewicht. In tegenstelling tot Native Page worden daarentegen niet-denaturerende gels gebruikt. Daarom worden moleculen gescheiden op basis van hun grootte, lading en vorm.

Polyacrylamide-gelelektroforese (pagina) maakt gebruik van een gel die is gemaakt door acrylamidemonomeren te polymeriseren met methyleenbisacrylamide. Het polyacrylamide is taaier en meer hittebestendig dan agarose. De polyacrylamidegels hebben een kleinere poriegrootte die de efficiënte scheiding van eiwitten mogelijk maakt. Er zijn twee hoofdtypen pagina-instellingen, namelijk SDS-pagina en Native Page. SDS-pagina of Natrium-dodecylsulfaat Polyacrylamide gelelektroforese scheidt eiwitten op basis van hun molecuulgewichten. Denaturerende gels worden gebruikt in SDS-pagina. Native Page gebruikt niet-denaturerende gels en scheidt eiwitten op basis van hun grootte, lading en vorm (3D-conformatie).

INHOUD

1. Overzicht en belangrijkste verschil
2. Wat is een SDS-pagina?
3. Wat is Native Page
4. Overeenkomsten Tussen SDS-pagina en Native Page
5. Vergelijking zij aan zij - SDS-pagina versus inheemse pagina in tabelvorm
6. Samenvatting

Wat is een SDS-pagina??

SDS-pagina is de meest gebruikte elektroforetische techniek die wordt gebruikt voor het scheiden van eiwitten op basis van hun molecuulgewicht. De gel is gemaakt door het toevoegen van SDS (natriumdodecylsulfaat), dat een detergent is. SDS-kunstgebitproteïnen in monomeren. SDS is een anionisch detergent. Daarom voegt het een netto negatieve lading toe aan de eiwitten binnen een breed pH-bereik. Wanneer de netto negatieve lading wordt verleend aan de eiwitmoleculen, vanwege de ladingsvariatie, worden de complexe structuren afgebroken. Door de negatieve lading trekken eiwitten naar het positieve einde. Aldus gaan moleculen met een lager molecuulgewicht sneller op de gelmatrix en kunnen dichtbij de anode worden waargenomen, terwijl de eiwitten met een hoger molecuulgewicht dichter bij de putjes worden waargenomen..

Figuur 01: SDS-pagina

De SDS-binding aan de polypeptideketen is evenredig met zijn relatieve molecuulmassa. Daarom kan de molecuulmassa ook via SDS-pagina worden bepaald. De kleuring van de SDS Page gels gebeurt door broomfenolblauwkleuring. Toepassingen van SDS-paginabereik in een grotere mate, waar het kan worden gebruikt om de relatieve molecuulmassa te schatten en om de relatieve abundantie van eiwitten in een eiwitmengsel te bepalen. SDS-pagina kan ook worden gebruikt om de eiwitverdeling in een mengsel van eiwitten te bepalen. SDS-pagina wordt ook toegepast voor het zuiveren en beoordelen van eiwitten. Het wordt gebruikt als een voorbereidende procedure voor western blotting en hybridisatie, die op zijn beurt wordt gebruikt voor het in kaart brengen en identificeren van eiwitten.

Wat is Native Page?

Native Polyacrylamide-gelelektroforese (Native Page) maakt gebruik van een niet-denaturerende gel. Daarom wordt SDS of een ander denaturerend middel niet aan de gelmatrix toegevoegd. In Native Page is de scheiding van eiwitten gebaseerd op de lading en de grootte van het eiwit. Daarom hangt de mobiliteit van het eiwit af van de lading en de grootte van het eiwit.

De lading van het eiwit hangt af van de zijketens van de aminozuren. Als de zijketens negatief geladen zijn, krijgt het eiwit een totale negatieve lading en omgekeerd. Eiwitten behouden een 3D-conformatie vanwege het vouwen dat plaatsvindt. Vouwresultaten van de verschillende bindingstypes in eiwitten zoals disulfidebindingen, hydrofobe interacties en waterstofbruggen. Daarom, als de oorspronkelijke pagina wordt gedragen op een neutrale pH, zullen de eiwitten worden gescheiden volgens de moleculaire vorm van het eiwit. Daarom kan Native Page worden gebruikt als een gevoelige techniek om de verandering in lading of conformatie van het eiwit te detecteren.

Het belangrijkste voordeel van de oorspronkelijke pagina is dat het eiwit dat voor de pagina-analyse wordt gebruikt, na de pagina-analyse in de oorspronkelijke staat kan worden hersteld, omdat het eiwit niet wordt gestoord tijdens het proces. Native Page is een relatief hoge doorvoertechniek en de stabiliteit van het eiwit neemt toe.

Afbeelding 02: Native Page

Na voltooiing van de gelrun kan de natfolie-gel worden bekeken door te kleuren met broomfenolblauw of elk ander geschikt kleuringsreagens. De toepassingen van Native Page omvatten scheiding van zure eiwitten waaronder glycoproteïnen zoals humaan recombinant erythropoietine of de identificatie van eiwitten die aanwezig zijn in Bovine Serum Albumine (BSA).

Wat zijn de overeenkomsten tussen SDS-pagina en Native Page?

• Zowel SDS-pagina en Native Page-systemen gebruiken polyacrylamidegel als de matrix van de gel.
• Beide worden gebruikt voor de scheiding en identificatie van eiwitten.
• Beide maken gebruik van elektroforetische mobiliteit om de verbindingen te scheiden.
• Beide kunnen op een verticale of horizontale manier worden gedaan (meestal als verticale pagina-instellingen omdat de looplengte groter is).
• Het elektroforeseapparaat inclusief de galmank, kammen, de voeding is vereist voor de werking van beide technieken.
• Het visualiseren van de gel kan worden gedaan door middel van kleuringsmethoden in beide technieken.

Wat is het verschil tussen SDS-pagina en Native Page?

SDS-pagina versus native pagina
SDS-pagina of natrium-dodecylsulfaat Pagina scheidt eiwitten op basis van hun molecuulgewicht en het maakt gebruik van een denaturerende gel.	Native Page gebruikt niet-denaturerende gels en scheidt eiwitten op basis van hun grootte, lading en vorm (3D-conformatie).
Type gel
Een denaturerende gel wordt gebruikt op SDS-pagina.	Een niet-denaturerende gel wordt gebruikt op de oorspronkelijke pagina.
Aanwezigheid van SDS
SDS is aanwezig als een reinigingsmiddel om een ​​negatieve lading op het monster te geven op de SDS-pagina.	SDS is niet aanwezig op de oorspronkelijke pagina.
Scheidingsbasis
De scheiding van eiwitten hangt af van het molecuulgewicht van het eiwit op de SDS-pagina.	De scheiding is afhankelijk van de grootte en vorm van het eiwitmolecuul op de oorspronkelijke pagina.
Stabiliteit van de proteïne
Stabiliteit van het eiwit is laag in SDS-pagina.	Stabiliteit van eiwitten is hoog op de oorspronkelijke pagina.
Herstel van het oorspronkelijke eiwit
Niet mogelijk omdat het gedenatureerd is op SDS-pagina.	Mogelijk op de oorspronkelijke pagina.

Samenvatting - SDS-pagina versus native Pagina

SDS-pagina en Native Page zijn twee soorten Polyacrylamide-gelelektroforese technieken die worden gebruikt om eiwitten te scheiden. SDS-pagina is behandeld met een detergens met de naam SDS. SDS geeft een totale negatieve lading aan het eiwit, wat vervolgens resulteert in de denaturatie van het eiwit. Daarom worden de eiwitten gescheiden op basis van hun molecuulgewicht. In tegenstelling hiermee gebruikt de Native Page-techniek geen denatureringsagent. Dus de eiwitten worden ofwel gescheiden op basis van hun grootte of de vorm. Dit is het verschil tussen SDS-pagina en native-pagina.

Referentie:

1. "Het principe en de methode van polyacrylamide gelelektroforese (SDS-PAGE)." Het principe en de methode van polyacrylamide gelelektroforese (SDS-PAGE) | MBL Life Sience -ASIA-. Beschikbaar Hier
2. "Native Gels." Alliance Protein Laboratories | Biophysical Characterization Services. Beschikbaar Hier  

Afbeelding met dank aan:

1.'SDS-PAGINA Elektroforese'door Bensaccount op Engelse Wikipedia, (CC BY 3.0) via Commons Wikimedia  
2. 'Laad een monster in een polyacrylamide gelelektroforese well'By Blaz Nemec uit Ljubljana, Slovenië (CC BY-SA 2.0) via Commons Wikimedia