Verschil tussen voorwaartse en omgekeerde primer

Belangrijkste verschil - Doorsturen versus Reverse Primer
 

Polymerase-kettingreactie (PCR) is een DNA-amplificatiemethode die wordt gebruikt in moleculaire biologische toepassingen. Het is een veelgebruikte techniek die miljoenen tot miljarden kopieën maakt van een bijzonder geïnteresseerde DNA-sequentie. Het is een in vitro methode uitgevoerd in laboratoria. PCR-techniek is volledig afhankelijk van het commercieel geproduceerde DNA-polymerase dat Taq-polymerase wordt genoemd. En het vereist ook verschillende andere componenten en goed temperatuurbehoud. Een belangrijk onderdeel zijn primers. Primers zijn de korte DNA-sequenties die specifiek zijn ontworpen voor de doel-DNA-sequentie. Ze zijn meestal ongeveer 20 nucleotiden lang. Taq-polymerase katalyseert het toevoegen van nucleotiden aan een reeds bestaande nucleotidesequentie. Vandaar dat primers dienen als uitgangspunten voor de synthese van nieuwe strengen. Taq-polymerase werkt alleen in een richting van 5 'naar 3', vandaar dat de DNA-synthese in dezelfde richting van 5 'naar 3' plaatsvindt. Omdat DNA dubbelstrengs is, zijn er twee soorten primers nodig bij PCR. Ze staan ​​bekend als forward primer en reverse primer. Voorwaartse en achterwaartse primers worden aangeduid op basis van de richting van de verlenging van de primer in DNA wanneer DNA-synthese plaatsvindt. De voorwaartse primer hybridiseert met de antisense DNA-streng en initieert de synthese van + ve streng van het gen in de richting 5 'naar 3'. Omgekeerde primer hybridiseert met de sense streng en initieert de synthese van de complementaire streng van de coderende streng; dat is -ve de streng van het gen in 5'-richting naar 3'-richting. Dit is de belangrijk verschil tussen voorwaartse en achterwaartse primers.

INHOUD

1. Overzicht en belangrijkste verschil
2. Wat is een Forward Primer
3. Wat is een reverse primer
4. Overeenkomsten tussen voorwaartse en omgekeerde primer
5. Vergelijking zij aan zij - Forward vs Reverse Primer in tabelvorm
6. Samenvatting

Wat is een Forward Primer?

Forward-oriëntatie is de synthese van de coderende streng of de sense-streng van een gen. Taq-polymerase katalyseert de synthese van een nieuwe streng in de richting 5 'naar 3'. De synthese van de coderende streng vindt plaats wanneer de primer hecht met de niet-coderende of de antisense streng en langwerpig in de richting 5 'naar 3'.

Figuur 01: Voorwaartse en omgekeerde primers

De primer die hybridiseert met de antisense streng of de niet-coderende streng of de matrijsstreng is bekend als voorwaartse primer aangezien voorwaartse primer werkt als een startpunt voor de synthese van codering of de positieve streng van het gen. Voorwaartse primer heeft een korte nucleotidensequentie die complementair is aan het 3'-flankerende uiteinde van de antisense streng. Het hybridiseert met de antisense streng en vergemakkelijkt het Taq-polymerase om nucleotiden toe te voegen die complementair zijn aan de matrijsstreng..

Wat is een reverse primer?

Reverse-primer is de korte DNA-sequentie die hybridiseert met het 3'-uiteinde van de sense-streng of de coderende streng. Omgekeerde primer dient als startpunt voor het synthetiseren van een complementaire streng van de coderende sequentie of de niet-coderende sequentie. Omgekeerde primer is complementair ontworpen aan het 3'-uiteinde van de coderende streng. Derhalve hybridiseert het met het flankerende 3'-uiteinde van de coderende streng en laat Taq-polymerase de antisense-streng of de matrijsstreng synthetiseren. Omdat de oriëntatie ervan omgekeerd is, wordt deze primer als reverse primer gelabeld.

Zowel reverse als forward primers zijn belangrijk voor de productie van miljoenen tot miljarden kopieën van specifieke regio's van DNA die zijn gericht of geïnteresseerd.

Wat zijn de overeenkomsten tussen voorwaartse en omgekeerde primer?

• Zowel voorwaartse als omgekeerde primers zijn gemaakt van oligonucleotiden.
• Zowel voorwaartse als reverse primers bezitten een korte nucleotidesequentie die complementair is aan de flankerende uiteinden van de dubbele DNA-strengen.
• Zowel voorwaartse als omgekeerde primers bestaan ​​gewoonlijk uit 20 nucleotiden.
• Zowel Forward als Reverse Primers worden gebruikt in polymerase kettingreacties.
• Zowel voorwaartse als reverse primers worden commercieel gesynthetiseerd.
• Zowel de voorwaartse als de reverse primers zijn temperatuurstabiel en normaal hebben ze een vergelijkbare Tm.
• Zowel voorwaartse als omgekeerde primers worden gehybridiseerd met de doelwit-DNA-sequenties.
• Zowel Forward als Reverse Primers zijn ontworpen volgens de PCR-reacties.
• Zowel Forward als Reverse Primers worden als startpunten voor de DNA-amplificatie gebruikt.
• Zowel reverse als forward primers zijn belangrijk voor de productie van miljoen kopieën van bepaalde gebieden van doelgerichte of geïnteresseerde DNA-sequenties.

Wat is het verschil tussen Voorwaartse en Reverse Primer?

Forward Primer vs Reverse Primer
Voorwaartse primer is de korte DNA-sequentie die hybridiseert met het 3'-uiteinde van de niet-coderende of de matrijsstreng van het gen en dient als startpunt voor het synthetiseren van de coderende sequentie.	Omgekeerde primer is de korte DNA-sequentie die hybridiseert met het 3'-uiteinde van de coderende of de niet-gemerkte streng en dient als het startpunt om de niet-coderende sequentie te synthetiseren.
Gloei Strand
Voorwaartse primer gloeit met sjabloonstreng.	Omgekeerde primer gloeit met de niet-geslepen streng.
Resulterende nieuwe sequentie
Voorwaartse primer vergemakkelijkt de synthese van de coderende sequentie.	Omgekeerde primer vergemakkelijkt de synthese van de niet-coderende sequentie.

Samenvatting - Doorsturen versus Reverse Primer

Er zijn twee soorten primers betrokken bij de PCR-techniek. Het zijn voorwaartse en achterwaartse primers. Op basis van de verlenging van de primer in nieuwe DNA-strengsynthese, worden deze primers gelabeld of benoemd. Taq-polymerase synthetiseert het nieuwe DNA in 5 'naar 3'-oriëntatie. Vandaar dat primers zijn ontworpen als complementair aan 3'-uiteinden van de dubbele strengen. Voorwaartse primer die langwerpig is in 5 'naar 3'-richting hybridiseert met het 3'-uiteinde van de antisense of de template of de niet-coderende sequentie. Het dient als startpunt voor het synthetiseren van de coderingssequentie. Omgekeerde primer die langwerpig is in de richting 5 'naar 3' hybridiseert met het 3'-uiteinde van de codering of de niet-plaat of de sense streng. Het dient als startpunt om de niet-coderende sequentie te synthetiseren. Dit is het verschil tussen voorwaartse en achterwaartse primer.

Referentie:

1. "Primer (Moleculaire biologie)." Wikipedia, Wikimedia Foundation, 20 feb. 2018. Beschikbaar Hier 
2. "Polymerase-kettingreactie (PCR)." Khan Academy. Beschikbaar Hier 

Afbeelding met dank aan:

1.'Primers RevComp Melted2'Bij Richard Wheeler (Zephyris) - Eigen werk, (CC BY-SA 3.0) via Commons Wikimedia