Verschil tussen warme en koude trypsinisatie

Belangrijkste verschil - Warm vs Koude trypsine

Warm en koud trypsinisatie zijn twee methoden die worden gebruikt bij de enzymatische desaggregatie van cellen bij het kweken van dierlijke cellen. De belangrijk verschil tussen warme en koude trypsinisatie, zoals de namen suggereren, hangt af van de temperatuur waarbij de trypsine wordt toegevoegd voor cellulaire disaggregatie. Warme trypsinisatie vindt plaats onder hogere temperatuuromstandigheden (36,5 - 37) ⁰C) terwijl koude trypsinisatie plaatsvindt onder omstandigheden van lage temperatuur.

Tijdens het proces van primaire celkweek van dierlijke cellen, zijn er drie hoofdmethoden gebruikt en deze zijn succesvol gebleken. De drie methoden omvatten mechanische desaggregatie van cellen, enzymatische desaggregatie van cellen en de primaire explantatietechniek. De enzymatische desaggregatie van cellen die leidt tot de isolatie van cellen en het wordt gedaan door het eiwitafbrekende enzym trypsine. Daarom staat dit proces bekend als Trypsinization. Trypsinisatie kan worden uitgevoerd onder twee verschillende omstandigheden, namelijk Warm Trypsinisatie en Koude Trypsinisatie. Warm trypsiniseren is de methode om de cellen te behandelen met trypsine onder warme omstandigheden bij een temperatuur van 36,5 - 37 ⁰C. Koude trypsinisatie is het proces van behandeling met trypsine dat plaatsvindt onder koudere omstandigheden, bij voorkeur in ijs, met behoud van zeer lage temperaturen.

INHOUD

1. Overzicht en belangrijkste verschil
2. Wat is warme trypsinisatie
3. Wat is Cold Trypsinization
4. Overeenkomsten tussen warme en koude trypsinisatie
5. Vergelijking zij aan zij - Warm versus koud Trypsinisatie in tabelvorm
6. Samenvatting

Wat is warme trypsinisatie?

Trypsinisatie kan worden uitgevoerd om de cellulaire componenten te disaggregeren om de cellen te isoleren om een primaire celkweek te produceren. Trypsine is een eiwitafbraakenzym en het enzymmengsel dat bij trypsinisatie wordt gebruikt, kan een ruw extract of een gezuiverd product zijn. Van het ruwe extract wordt gezegd dat het efficiënter is in eiwitlyse en celdesintegratie omdat het andere afbrekende enzymen bevat.

Warme trypsinisatie is de meest algemeen gebruikte enzymatische methode voor celdisaggregatie die plaatsvindt onder hogere temperatuuromstandigheden. Voorafgaand aan de behandeling door trypsinisatie wordt het gewenste weefsel in kleinere stukken gehakt. Het vergemakkelijkt het eenvoudige desaggregatieproces. Het gehakte weefsel wordt vervolgens gewassen in een speciaal medium dat bekend staat als het Dissection Basal Salt-medium.

Na voltooiing van de wasstap worden de cellen getransformeerd in een kolf die het actieve enzym bevat, dat trypsine is. Omdat deze techniek een warm trypsinisatieprotocol impliceert, wordt het trypsine op een temperatuur van ongeveer 37 geplaatst ⁰C voor ongeveer vier uur.

Figuur 01: Trypsine

De inhoud wordt gemengd en geroerd door middel van centrifugatiewerkwijzen voor het gemak van het protocol en om het desaggregatieproces te versnellen. Zodra de aanbevolen tijd is bereikt, kunnen de cellen worden afgeleid van de supernatant. De cellen afgeleid van het supernatant worden vervolgens geïncubeerd op een bepaalde temperatuur en tijd.

Wat is Cold Trypsinization?

Koude trypsinisatie is het andere type trypsinisatie dat plaatsvindt onder koude omstandigheden. Bij deze techniek worden de cellen die worden gehakt en gewassen in flesjes op ijs geplaatst en dan gedrenkt met trypsine. De periode van inweken is veel langer - ongeveer 6 - 24 uur.

Na voltooiing van de inweekprocedure wordt het trypsine uit het cellysaat verwijderd en worden de stukken weefsel verder bij 37 geïncubeerd.⁰C ongeveer 20 - 30 minuten. De desaggregatie van de cellen wordt teweeggebracht door herhaaldelijk pipetteren van het weefselmengsel. Dit zal de cellen toelaten om van het membraan te dissociëren en naar het supernatant te komen. Zodra de cellen zich in het supernatant bevinden, worden ze geïncubeerd en gekweekt op een gewenste temperatuur en tijdsperiode.

De koude trypsinisatie methode heeft verschillende voordelen

Hogere opbrengst van levensvatbare cellen als de celbeschadiging wordt geminimaliseerd. De celschade wordt geminimaliseerd door geen centrifugatiestappen te gebruiken.
Zeer handige methode.
Minder arbeidsintensief.

De belangrijkste beperking van de koude trypsinisatie methode is dat grote hoeveelheden in één geval niet kunnen worden gebruikt.

Wat zijn de overeenkomsten tussen warme en koude trypsinisatie?

Zowel warme als koude trypsinisatieprocessen gebruiken het enzym trypsine voor desaggregatie van cellen.
Zowel warme als koude trypsinisatieprocessen worden gebruikt in celkweekprocedures voor de desaggregatie van cellen.
Bij zowel warme als koude trypsinisatiebehandelingsprocedures zijn de cellen afgeleid van het supernatant.

Wat is het verschil tussen warme en koude trypsinisatie?

Warm versus koud Trypsinisatie
Warm trypsiniseren is de methode om de cellen te behandelen met trypsine onder warme omstandigheden bij een temperatuur van 36,5 - 37 ⁰.	Koude trypsinisatie is het proces van behandeling met trypsine dat plaatsvindt onder koudere omstandigheden, bij voorkeur in ijs, waarbij zeer lage temperaturen worden gehandhaafd.
Protocol
De gesneden stukjes weefsel worden op 37 gehouden ⁰C continu tijdens de procedure.	De stukken gesneden weefsel worden aanvankelijk op ijskoude temperaturen gehouden en daarna op 37 gehouden ⁰.
Temperatuur
Warme trypsinisatie vindt plaats op 36,5 - 37 ⁰	Koude trypsinisatie vindt plaats bij ijskoude temperaturen.
Tijd verbruikt
Minder tijd nodig voor het hele proces (ongeveer 4 uur) van warme trypsinisatie.	Langere tijd nodig (ongeveer 6 - 24 uur) voor koude trypsinisatie.
Opbrengst van levensvatbare cellen
Laag in warme trypsinisatie.	Hoog in koude trypsinisatie.
Gebruik van centrifugatie
Centrifugatie is vereist voor disaggregatie van cellen bij warme trypsinisatie.	Centrifugatie is niet vereist bij koude trypsinisatie.
Aanvankelijke hoeveelheid weefsel voor trypsinisatie
Een grotere hoeveelheid weefsel kan worden gebruikt bij warme trypsinisatie.	Een kleinere hoeveelheid weefsel kan worden gebruikt bij koude trypsinisatie.
Celschade
Hoog door centrifugatie bij warme trypsinisatie.	Minder door koude trypsinisatie.

Samenvatting - Warm vs Koude trypsine

Trypsinisatie is de methode voor het gebruik van het eiwitafbrekende enzym trypsine voor de disaggregatie en bereiding van primaire celculturen tijdens het celkweekproces. Er zijn twee hoofdtechnieken voor trypsinisatie op basis van de temperaturen die tijdens de procedure worden gebruikt. Het zijn warme en koude trypsinisatie. Warme trypsinisatie wordt uitgevoerd bij 37 ⁰C terwijl koude trypsinisatie wordt uitgevoerd onder ijskoude omstandigheden. Hoewel koude trypsinisatie meer tijd kost om te voltooien, wordt er gezegd dat het een hogere opbrengst aan levensvatbare cellen heeft. Dit is het gevolg van het feit dat celbeschadiging wordt geminimaliseerd in koude trypsinisatie omdat het geen krachtige centrifugatiestappen gebruikt. Dit is het verschil tussen warme en koude trypsinisatie.

Referentie:

1. "Trypsinisatie." Trypsinisatie - een overzicht | ScienceDirect-onderwerpen. Beschikbaar Hier
2. "Primaire celkweek: 3 technieken (met diagram)." Biologie Discussie, 16 oktober 2015. Beschikbaar Hier

Afbeelding met dank aan:

1.'Trypsin actieve site'door Fdardel - Eigen werk, (CC BY-SA 3.0) via Commons Wikimedia

Cellenbiologie