Verschil tussen klonen en subklonen

Belangrijkste verschil - kloneren versus subklonen
 

Klonen en subklonen zijn moleculair-biologische procedures die genetisch identieke cellen of organismen creëren die het DNA of gen dragen dat van belang is. Klonen is een techniek waarbij insertie van het geïnteresseerde gen of DNA in een vector, replicatie ervan in een gastheerbacterie en productie van cellen of organismen die exacte kopieën van de genetische samenstelling zijn. Subklonen is een techniek waarbij insertie van het gen van belang, dat al in een vector is ingevoegd, in een secundaire vector, replicatie ervan in een gastheerbacterie en productie van genetisch identieke kopieën van cellen of organismen wordt geïnsereerd. Het belangrijkste verschil tussen klonen en subklonen is dat, bij kloneren zet het gen van belang, eenmaal geligeerd in een vector, het kloneringsproces voort, terwijl bij de subklonering het reeds gekloonde gen van belang wordt gescheiden van de oudervector en opnieuw wordt ingebracht in een ontvangende vector en het proces voortzet.

INHOUD
1. Overzicht en belangrijkste verschil
2. Wat is klonen
3. Wat is subklonen
4. Vergelijking zij aan zij - klonen versus subklonen
5. Samenvatting

Wat is klonen?

Klonen is de procedure die genetisch identieke organismen of cellen produceert. In de natuur gebeurt klonen in de vorm van aseksuele reproductie. Wanneer er geen genetische recombinatie of wijziging is, ontvangen dochtercellen dezelfde genetische samenstelling van de ouder. Prokaryotische en eukaryotische organismen creëren klonen door binaire splitsing, ontluiking, mitose, enz. In de moleculaire biologie is klonering van genen of specifieke DNA-fragmenten een populaire methode om de structuur en functie van die specifieke DNA-sectie te bestuderen.

Het hoofddoel van moleculair klonen is om miljoenen kopieën te maken van genetisch identieke cellen of organismen die het DNA-fragment van belang (voornamelijk genen) dragen. Het creëert organismen met exacte genetische kopieën van een ander. In de eerste plaats worden specifieke moleculen gekloond in moleculaire studies om structurele en functionele informatie te verkrijgen en voor DNA-sequencing. Ook, voor de productie van specifieke eiwitten of producten op grote schaal, wordt klonen algemeen gebruikt.

Klonen Procedure

De basisstappen van de kloneringsprocedure zijn als volgt.

1. Identificatie en isolatie van het gen van belang. (Amplificatie van het gen van belang door PCR).
2. Restrictiedigestie van het gen van belang (Restrictie-endonuclease sneed het gen).
3. Restrictiedigestie van het vector-DNA. (Vector DNA wordt ook gesneden met behulp van hetzelfde restrictie-endonuclease).
4. Insertie van het gen in de vector en vorming van het recombinante molecuul.
5. Transformatie van de recombinante vector in een gastheerbacterie.
6. Isolatie en identificatie van de getransformeerde bacteriën (plasmidevector moet een selecteerbaar gen bevatten, meestal een antibioticumresistentiegen voor het screenen van getransformeerde bacteriën).
7. Recombinante genexpressie binnen de gastheer.

Figuur_01: Kloneringsprocedure

Wat is subklonen?

Subklonering is een procedure voor het verplaatsen van een gen van belang van de ene vector naar een andere vector om de expressie van het gen te zien om de gewenste functionaliteit van het gen te verkrijgen. In deze methode zijn twee vectoren betrokken; namelijk oudervector en bestemmingsvector. Gekloonde inserts worden opnieuw in een tweede vector in subklonering geplaatst. Het doel van het overbrengen van het gen van de eerste vector naar de tweede vector is om iets te verkrijgen dat niet door de eerste vector kon worden gedaan of om een ​​gen opnieuw binnen het reeds gekloneerde fragment van DNA te scheiden en het alleen tot expressie te brengen. Restrictie-enzymen worden aan het begin van deze procedure gebruikt.

Subkloneringsprocedure

De basisstappen voor subklonen zijn als volgt.

1. Met de hulp van restrictie-endonucleasen, scheiding van het DNA van belang in het donorplasmide (oudervector).
2. Amplificatie van het interessante DNA met behulp van PCR.
3. Zuivering van het PCR-product (DNA van belang) door gelelektroforese.
4. Het openen van het ontvanger-plasmide door dezelfde restrictie-endonucleasen die worden gebruikt om DNA van belang in het oorspronkelijke plasmide te scheiden.
5. Ligatie van het DNA van interesse (gen) in het ontvangende plasmide om het gesubkloneerde plasmide te creëren.
6. Transformatie van de gesubkloneerde vector in een competente gastheerbacterie.
7. Screening van getransformeerde cellen.
8. Zuivering van het plasmide-DNA en gebruik voor DNA-sequentiebepaling of expressie van de genen om de gewenste producten te verkrijgen.

Subklonering wordt uitgevoerd bij gelegenheden van het isoleren van één gen uit de gekloneerde groep van genen of wanneer het gen van belang is vereist om over te brengen in een bruikbaar plasmide om de exacte functie van het gen van belang te zien.

Figuur 02: Subkloneringsprocedure

Wat is het verschil tussen klonen en subklonen??

Klonen versus subklonen
Klonen is de procedure die genetisch identieke organismen of cellen produceert.	Subklonen is een procedure voor het verplaatsen van een gen van belang van de ene vector naar een andere vector om de expressie van het gen te zien om de gewenste functionaliteit van het gen te verkrijgen..
Werkwijze
Scheid het DNA van interesse van het organisme en ingebracht in een vector eenmaal en gekloond	Al gekloond DNA wordt gescheiden van de eerste vector en ingebracht in een tweede vector en gekloond.
Voeg beweging in via vectoren
Verplaatst geen inserts (DNA van belang) van de ene vector naar de andere vector.	Verplaats inserts van bovenliggende vector naar bestemmingsvector.

Samenvatting - Kloneren versus subklonen

Klonen creëert genetisch identieke cellen of organismen met het ingevoegde gen of interessante DNA. Het gaat door de scheiding en insertie van het DNA van belang in een vector en expressie in een gastheerbacterie. Subklonen heeft vergelijkbare stappen als klonen. Bij subklonering wordt echter al gekloneerd DNA-fragment (gen van belang) ingevoegd in een vector en getransformeerd in een gastheerbacterie. Dat is het belangrijkste verschil tussen klonen en subklonen.

Referenties

1. Lodish, Harvey. "DNA-klonering met plasmide-vectoren." Moleculaire celbiologie. 4e editie. U.S. National Library of Medicine, 01 januari 1970. Web. 5 maart 2017
2. “Subkloneren.” Wikipedia. Wikimedia Foundation, 14 februari 2017. Web. 6 maart 2017
3. "Subklonen." Subklonen | Open Access-artikelen | Open Access-tijdschriften | Conference Proceedings | Editors | Auteurs | Beoordelaars | wetenschappelijke evenementen. N.p., n.d. Web. 6 maart 2017
4. Wackerhage, Henning. "Hoe te subkloonen." Hoe te subkloonen. N.p., 01 januari 1970. Web. 6 maart 2017

Afbeelding Met dank

1. Molecular Cloning Procedure - By CNX OpenStax [CC BY 4.0], via Wikimedia Commons
2. Subkloning Procedure - Door De oorspronkelijke uploader was Takometer op Engelse Wikipedia (Overgezet van en.wikipedia naar Commons.) [CC BY 2.5], via Wikimedia Commons