Verschil tussen RT-PCR en QPCR

Reverse-transcriptiepolymerasekettingreactie (RT-PCR)

RT-PCR versus QPCR

Ontwikkelingen in de biotechnologie hebben geresulteerd in de ontdekking van verschillende manieren om in de loop van de jaren aan de vraag naar orgaantransplantaties te voldoen. Vroeger kon een persoon die vrijwillig een orgaan onmiddellijk na de dood doneerde aan een patiënt in nood, de operatie voor transplantaties alleen maar opstarten. De voortdurende studies en onderzoeken van biologen leidden tot de ontdekking van stamcellen.

Stamcellen verwijzen naar die cellen die zijn genomen uit het DNA van een embryo, dat zal dienen als de bron voor de regeneratie van cellen die in principe een kloon zou zijn van het orgaan waar het DNA is teruggehaald. Terwijl mensenrechtenactivisten pleiten voor het stopzetten van dergelijke procedures, hebben succesvolle operaties inderdaad de effectiviteit van stamcelontwikkelingen bij orgaantransplantaties bewezen.

Alvorens stamcellen te begrijpen en volledig te begrijpen, is het echter nodig om vertrouwd te raken met de verschillende terminologieën die met deze wetenschappelijke ontdekking geassocieerd zijn. Stamcelteelt heeft te maken met DNA en de codering ervan. Het is dus van vitaal belang voor studenten of andere personen die in het veld geïnteresseerd zijn om onderscheid te maken tussen RT-PCR en qPCR.

Reverse-transcriptiepolymerasekettingreactie (RT-PCR) is een van de vele varianten van de polymerasekettingreactie of PCR. Deze laboratoriumtechniek wordt veel gebruikt in de moleculaire biologie om de wetenschappers in staat te stellen meerdere kopieën van een bepaalde DNA-sequentie te produceren via "amplificatie". Het verschil tussen RT-PCR en traditionele PCR is dat RNA eerst in omgekeerde richting wordt getranscribeerd. zijn DNA-complement, dat de reverse transcriptase gebruikt. Het nieuwe complementaire DNA dat de omgekeerde transcriptie bevat, zal vervolgens worden geamplificeerd met behulp van de traditionele PCR of real-time PCR.

De meeste studenten die dit proces bestuderen, maken vaak de fout om reverse transcriptie PCR en real-time PCR uit te wisselen, aangezien de twee op dezelfde manier worden afgekort. Om verwarring te voorkomen, labelen biologen de real-time PCR als kwantitatieve real-time PCR of qPCR.

QPCR verschilt sterk van RT-PCR, omdat qPCR verantwoordelijk is voor het meten van amplificatie als het optreedt. Het kan gezegd worden dat RT-PCR het amplificatieproces start, terwijl qPCR dit meet terwijl de procedure plaatsvindt.

Kwantitatieve real-time PCR

QPCR heeft een revolutie teweeggebracht in de traditionele eenrichtingsaanpakmethode als het gaat om het kwantificeren van DNA en RNA, omdat toepassing van de qPCR-methode het biologen mogelijk maakt om de beginconcentratie van het nucleïnezuur te bepalen nog voordat de resultaten van de reactie zijn waargenomen en neergeschreven.

De toepassing van qPCR, die nu wordt beschouwd als de meest krachtige en gevoelige analysetechniek voor genetische studies, is aanzienlijk verbreed. Het is momenteel betrokken bij kwantitatieve analyse van genexpressie, genotypering, detectie van pathogenen en analyse van SNP, samen met RNA-interferentiemetingen.

QPCR wordt vaak gecombineerd met het proces van omgekeerde transcriptie om het boodschapper-RNA en MicroRNA dat aanwezig is in de cellen van waargenomen weefsels en experimenten te kwantificeren. Dit geeft dan nog een ander zichtbaar verschil tussen de twee: RT-PCR kan worden gebruikt voor het amplificatieproces, maar het moet worden gefuseerd met qPCR voor kwantificatiedoeleinden.

QPCR is ook bekend als meer kwantitatief aangezien de gegevens kunnen worden verzameld als de exponentiële groei (log) fase van de PCR vordert. Biologen merken op dat de hoeveelheid van het bijproduct van PCR direct evenredig is met de hoeveelheid templatenucleïnezuur die via qPCR zal worden gemeten.

Aan de andere kant is RT-PCR verre van een kwantitatieve aard omdat de naleving van de intensiteit van de versterkte band op een gel volgens de ingestelde standaard van een concentratie kan leiden tot een "semi-kwantitatieve" conclusie.

Samenvatting:

1.QPCR en RT-PCR zijn beide termen die worden gebruikt in de biotechnologie en worden gebruikt voor de productie van meerdere kopieën van DNA.
2. RT-PCR wordt gebruikt om de omgekeerde transcriptie van de DNA-code te amplificeren; QPCR meet de versterking.
3. RT-PCR is voor amplificatie, terwijl qPCR voor kwantificering is.
4.QPCR is kwantitatief van aard, terwijl RT-PCR dat niet is.